Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Katnummer: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) is een multiplex kwantitatieve PCR-kit gebaseerd op RNA als template.Tijdens het experiment werden reverse transcriptie en kwantitatieve PCR in dezelfde buis uitgevoerd, wat de experimentele werking vereenvoudigde en het risico op besmetting verkleinde.In deze kit werd het cDNA van de eerste streng efficiënt gesynthetiseerd door hittebestendige reverse transcriptase en kwantitatief geamplificeerd door HotStart Tag DNA Polymerase.De kit bevat voornamelijk geoptimaliseerde MP-buffer, enzymenmix, enz. De bufferoplossing bevat al Mg2+en dNTP.Bovendien worden de factoren toegevoegd die de niet-specifieke PCR-amplificatie effectief kunnen remmen en de amplificatie-efficiëntie van meerdere qPCR-reacties kunnen verbeteren, die de amplificatie-efficiëntie kunnen garanderen en tot meerdere amplificatiereacties kunnen uitvoeren.Om het risico op aerosolbesmetting effectief te voorkomen is het dUTP/UDG-systeem toegevoegd.
Componenten
1. Buffer
2. Enzymmix
Specificatie
| Goede start | Ingebouwde hotstart |
| Detectiemethode | Primer-sonde-detectie |
| PCR-methode | Eénstaps RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA-polymerase |
| Soort monster | DNA |
Opslag condities
Het product wordt verzonden met droogijs en kan gedurende 1 jaar bij -25~-15℃ worden bewaard.Het moet frequent voorkomenbevriezen-dooien.Het wordt aanbevolen om apart op te slaan.
Instructies
1.Reactie Systeem
| Componenten | Volume (μl) | Laatste concentratie |
| 2 × MP-buffer | 12.5 | 1× |
| Enzymmix | 1 | - |
| Primer/probe-mix (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Sjabloon-RNA | 1-10 | - |
| RNase-vrij H2O | tot 25 | - |
Opmerkingen:
Zorg ervoor dat u vóór gebruik goed mengt, vermijd overmatige belletjes veroorzaakt door hevige trillingen.
A.Primerconcentratie: Primermix inclusief multiplexprimer, afhankelijk van de situatie kan de optimale primerconcentratie tussen 0,l en 1,0μM liggen.
B.Probeconcentratie: Probemix inclusief multiplex probe-labeling verschil fluorescerende groep, afhankelijk van de situatie kan de optimale probe-concentratie tussen 0,05 en 0,5 μM liggen.
C.Sjabloonverdunning: qPCR is zeer gevoelig en het wordt aanbevolen om de sjabloon te verdunnen.De controle-Ct-waarde is geschikt tussen 20 en 35.
D.Systeemvoorbereiding: bereid u voor in de ultraschone werktafel, en pipet en reageerbuis zonder nucleaseresidu;het wordt aanbevolen om de pistoolkop met filterelement te gebruiken.Vermijd kruisbesmetting en aërosolbesmetting.
2. Geoptimaliseerd fietsenProtocol
| Fiets stap | Temp. | Tijd | Cycli |
| Omgekeerde transcriptie | 50℃A | 20 minuten | 1 |
| Initiële denaturatie | 95℃ | 5 mins | 1 |
| Amplificatie reactie | 95℃ | 15sec |
40-45 |
| 60℃ b | 30sec c |
Opmerkingen:
A.Omgekeerde transcriptie: De temperatuur kan 42°C of 50°C selecteren.
B.Amplificatiereactie: De temperatuur wordt aangepast volgens de Tm-waarde van de ontworpen primers.
C.Verwerving van fluorescentiesignalen: Stel de experimentele procedure in volgens de vereisten van de instrumenthandleiding.
Opmerkingen
Draag de nodige PBM's, zoals een laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen.
