Universele SYBR GREEN qPCR Premix (blauw)

Katnummer: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) is een pre-oplossing voor 2×real-time kwantitatieve PCR-amplificatie, gekenmerkt door hoge gevoeligheid en specificiteit, is blauw van kleur en heeft het effect van tracering van monstertoevoeging.De kerncomponent Taq DNA-polymerase maakt gebruik van hete start van antilichamen om niet-specifieke amplificatie als gevolg van primer-annealing tijdens de monstervoorbereiding effectief te remmen.Tegelijkertijd voegt de formule de bevorderende factoren toe om de amplificatie-efficiëntie van de PCR-reactie te verbeteren en de amplificatie van genen met verschillende GC-inhoud (30 ~ 70%) gelijk te maken, zodat kwantitatieve PCR een goede lineaire relatie kan verkrijgen in een breed kwantitatief gebied. regio.Dit product bevat speciale ROX Passive Reference Dye, die toepasbaar is op de meeste qPCR-instrumenten.Het is niet nodig om de concentratie ROX op verschillende instrumenten aan te passen.Het is alleen nodig om primers en templates toe te voegen om het reactiesysteem voor te bereiden op amplificatie.

Componenten

Universele blauwe qPCR Master Mix

Opslag condities

Het product wordt geleverd met koelelementen en kan 18 maanden bij -25℃~-15℃ worden bewaard.Het is noodzakelijk om sterke lichtinstraling te vermijden bij het opslaan of voorbereiden van het reactiesysteem.

Specificatie

Instructies

1. Reactiesysteem

[Opmerking]: Meng vóór gebruik grondig om overmatige belletjes door krachtig schudden te voorkomen.

a) Primerconcentratie: De uiteindelijke primerconcentratie is 0,2 μmol/l en kan indien nodig ook worden aangepast tussen 0,1 en 1,0 μmol/l.

b) Templateconcentratie: Als de template een onverdunde cDNA-voorraadoplossing is, mag het gebruikte volume niet groter zijn dan 1/10 van het totale volume van de qPCR-reactie.

c) Sjabloonverdunning: Het wordt aanbevolen om de cDNA-voorraadoplossing 5-10 maal te verdunnen.De optimale hoeveelheid toegevoegde template is beter wanneer de door amplificatie verkregen Ct-waarde 20-30 cycli bedraagt.

d) Reactiesysteem: Het wordt aanbevolen om 20 μl of 50 μl te gebruiken om de effectiviteit en herhaalbaarheid van de doelgenamplificatie te garanderen.

e) Systeemvoorbereiding: bereid u voor op de superschone werkbank en gebruik de tips en reageerbuisjes zonder nucleaseresidu;het wordt aanbevolen om de tips met filterpatronen te gebruiken.Vermijd kruisbesmetting en aërosolbesmetting.

2.Reactie programma

Standaard programma

Snel programma

[Opmerking]: Het snelle programma is geschikt voor de overgrote meerderheid van genen, en standaardprogramma's kunnen worden uitgeprobeerd voor individuele genen met complexe secundaire structuur.

a) Uitgloeitemperatuur en -tijd: Pas deze aan op basis van de lengte van de primer en het doelgen.

b) Fluorescentiesignaalverwerving (★): Stel de experimentele procedure in volgens de vereisten in de gebruiksaanwijzing van het instrument.

c) Smeltcurve: Het standaardprogramma van het instrument kan normaal worden gebruikt.

3. Resultaatanalyse 

Voor kwantitatieve experimenten waren minimaal drie biologische replicaties nodig.Na de reactie moeten de amplificatiecurve en de smeltcurve worden bevestigd.

3.1 Versterkingscurve:

De standaard amplificatiecurve is S-vormig.Kwantitatieve analyse is het meest nauwkeurig wanneer de Ct-waarde tussen 20 en 30 ligt. Als de Ct-waarde lager is dan 10, is het noodzakelijk om de template te verdunnen en de test opnieuw uit te voeren.Wanneer de Ct-waarde tussen 30-35 ligt, is het noodzakelijk om de templateconcentratie of het volume van het reactiesysteem te verhogen, om de amplificatie-efficiëntie te verbeteren en de nauwkeurigheid van de resultaatanalyse te garanderen.Wanneer de Ct-waarde groter is dan 35, kunnen de testresultaten de expressie van het gen niet kwantitatief analyseren, maar kunnen ze worden gebruikt voor kwalitatieve analyse.

3.2 Smeltcurve:

De enkele piek van de smeltcurve geeft aan dat de reactiespecificiteit goed is en dat kwantitatieve analyse kan worden uitgevoerd;als de smeltcurve dubbele of meerdere pieken vertoont, kan er geen kwantitatieve analyse worden uitgevoerd.De smeltcurve vertoont dubbele pieken en het is noodzakelijk om te beoordelen of de niet-doelpiek primerdimeer is of niet-specifieke amplificatie door middel van DNA-agarosegelelektroforese.Als het een primerdimeer is, wordt aanbevolen de primerconcentratie te verlagen of primers met een hoge amplificatie-efficiëntie opnieuw te ontwerpen.Als het om niet-specifieke amplificatie gaat, verhoog dan de uitgloeitemperatuur of herontwerp de primers met specificiteit.

Opmerkingen

Draag de nodige persoonlijke beschermingsmiddelen, zoals een laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen！

Dit product is ALLEEN bedoeld voor onderzoeksdoeleinden!