Robustart Taq DNA-polymerase

Robustart Taq DNA-polymerase is een hotstart-DNA-polymerase.Dit product kan niet alleen de niet-specifieke reactie beter remmen die wordt veroorzaakt door de niet-specifieke annealing van primers of primeraggregatie tijdens het bereidings- en amplificatieproces van het PCR-systeem.Daarom heeft het een uitstekende specificiteit en is het effectiever voor de amplificatie van matrijzen met een lage concentratie, en is het geschikt voor gemultiplexte PCR-amplificatiereacties.Bovendien is dit product zeer goed toepasbaar en kunnen stabiele amplificatieresultaten worden verkregen bij verschillende soorten PCR-reacties.

Componenten

1.5 U/μL Robustart Taq DNA-polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ vrij) (optioneel)

3.25 mM MgCl₂(optioneel)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ vrij) bevat geen dNTP en Mg²+, voeg dNTP's en MgCl toe₂bij het voorbereiden van het reactiesysteem.

Aanbevolen toepassingen

1.Snelle versterking.

2.Meerdere versterking.

3.Directe amplificatie van bloed, uitstrijkjes en andere monsters.

4.Detectie van luchtwegaandoeningen.

Opslag condities

-20°C voor langdurige opslag, goed mengen vóór gebruik, veelvuldig invriezen en ontdooien vermijden.

*Als er neerslag optreedt na koeling, is dit normaal;Het wordt aanbevolen om vóór het mengen en gebruiken op kamertemperatuur te komen.

Eenheidsdefinitie

Eén actieve eenheid (U) wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 10 nmol deoxyribonucleotide gedurende 30 minuten bij 74°C in zuuronoplosbaar materiaal opneemt met gebruikmaking van geactiveerd zalmsperma-DNA als matrijs/primer.

Kwaliteitscontrole

1.SDS-PAGE elektroforetische zuiverheid groter dan 98%.

2.Versterkingsgevoeligheid, batch-tot-batch-controle, stabiliteit.

3.Geen exogene nuclease-activiteit, geen exogene endonuclease- of exonuclease-verontreiniging

Instructies

Reactie-opstelling

Opmerkingen:

1) een.De buffer bevat geen dNTP en Mg²+. Voeg dNTP's en MgCl toe₂bij het voorbereiden van het reactiesysteem.

2) b.Indien gebruikt voor qPCR/qRT-PCR, moeten fluorescerende probes aan het reactiesysteem worden toegevoegd.Gewoonlijk zal een uiteindelijke primerconcentratie van 0,2 μM goede resultaten opleveren;als de reactieprestaties slecht zijn, kan de primerconcentratie worden aangepast binnen het bereik van 0,2-1 μM.De sondeconcentratie wordt gewoonlijk geoptimaliseerd in het bereik van 0,1-0,3 μM.Concentratiegradiëntexperimenten kunnen worden uitgevoerd om de beste combinatie van primer en probe te vinden.

Thermisch cyclusprotocol

Opmerkingen

1.De amplificatiesnelheid van snelle DNA-polymerase mag niet minder zijn dan 1 kb/10 s.De snelheid waarmee de temperatuur stijgt en daalt, de temperatuurcontrolemodus en de warmtegeleidingsefficiëntie van verschillende PCR-instrumenten variëren sterk. Daarom wordt aanbevolen om de optimale reactieomstandigheden voor het specifieke snelle PCR-instrument te optimaliseren.

2.Het systeem is zeer aanpasbaar, met een hogere specificiteit en gevoeligheid.

3.Geschikt voor gebruik als PCR-detectiereagentia met hoge gevoeligheid en kan worden gebruikt in multiplex PCR-amplificatiereacties.

4.5′ → 3 ′ polymeraseactiviteit, 5 ′ → 3 ′ exonucleaseactiviteit;geen 3′ → 5 ′ exonuclease-activiteit;geen proefleesfunctie.

5.Geschikt voor kwalitatieve en kwantitatieve testen van PCR en RT-PCR.

6.Het 3'-uiteinde van het PCR-product is A, dat direct in een T-vector kan worden gekloneerd.

7.De driestapsmethode wordt aanbevolen voor primers met lage annealingstemperaturen of voor amplificatie van fragmenten langer dan 200 bp.