Superstart Taq DNA-polymerase
Superstart Taq DNA-polymerase is een hotstart-DNA-polymerase.Dit product kan niet alleen de niet-specifieke reactie beter remmen die wordt veroorzaakt door de niet-specifieke annealing van primers of primeraggregatie tijdens het bereidings- en amplificatieproces van het PCR-systeem.Daarom kan het betere resultaten bereiken bij meervoudige amplificatie.Ook kan het de amplificatie van sjablonen met een lage concentratie optimaliseren om een grotere hoeveelheid product te verkrijgen en een stabieler en extremer amplificatie-effect te bereiken.
Componenten
1.5 U/μL Superstart Taq DNA-polymerase
2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ vrij) (optioneel)
3.25 mM MgCl2(optioneel)
* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ vrij) bevat geen dNTP en Mg²+, voeg dNTP's en MgCl toe2bij het voorbereiden van het reactiesysteem.
Aanbevolen toepassingen
1.Detectie van Afrikaanse varkenspest.
2.SOA detectie.
3.Multiplex-versterking.
Opslag condities
-20°C voor langdurige opslag, goed mengen vóór gebruik, veelvuldig invriezen en ontdooien vermijden.
*Als er neerslag optreedt na koeling, is dit normaal;Het wordt aanbevolen om vóór het mengen en gebruiken op kamertemperatuur te komen.
Eenheidsdefinitie
Eén actieve eenheid (U) wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 10 nmol deoxyribonucleotide gedurende 30 minuten bij 74°C in zuuronoplosbaar materiaal opneemt met gebruikmaking van geactiveerd zalmsperma-DNA als matrijs/primer.
Kwaliteitscontrole
1.SDS-PAGE elektroforetische zuiverheid groter dan 98%.
2.Versterkingsgevoeligheid, batch-tot-batch-controle, stabiliteit.
3.Geen exogene nuclease-activiteit, geen exogene endonuclease- of exonuclease-verontreiniging
Instructies
Reactie-opstelling
| Componenten | Volume (μl) | Laatste concentratie |
| 10 × PCR-buffer II (Mg²+ vrij)a | 5 | 1× |
| dNTP's (10 mM elk dNTP) | 1 | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Superstart Taq DNA-polymerase (5U/μL) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 HE |
| 25 × PrimermixB | 2 | 1× |
| Sjabloon | - | <1 μg/reactie |
| ddH2O | Tot 50 | - |
Opmerkingen:
1) een.De buffer bevat geen dNTP en Mg²+. Voeg dNTP's en MgCl toe2bij het voorbereiden van het reactiesysteem.
2) b. Indien gebruikt voor qPCR/qRT-PCR, moeten fluorescerende probes aan het reactiesysteem worden toegevoegd.Gewoonlijk zal een uiteindelijke primerconcentratie van 0,2 μM goede resultaten opleveren;als de reactieprestaties slecht zijn, kan de primerconcentratie worden aangepast binnen het bereik van 0,2-1 μM.De sondeconcentratie is
3) meestal geoptimaliseerd in het bereik van 0,1-0,3 μM.Concentratiegradiëntexperimenten kunnen worden uitgevoerd om de beste combinatie van primer en probe te vinden.
Thermisch cyclusprotocol
| Tweestapsproces | |||
| Stap | Temperatuur | Tijd | Cycli |
| Pre-denaturatie | 95℃ | 1-5 minuten | 1 |
| Denaturatie | 95℃ | 10-20 sec | 35-50 |
| Gloeien / Verlengen | 56-64℃ | 20-60 sec | |
| Tdrie-stap proces | |||
| Stap | Temperatuur | Tijd | Cycli |
| Pre-denaturatie | 95℃ | 1-5 minuten | 1 |
| Denaturatie | 95℃ | 10-20 sec | 35-50 |
| Gloeien | 56-64℃ | 10-30 sec | |
| Verlenging | 72℃ | 10-60 sec | |
Opmerkingen
1.Het kan 95 ℃ of 94 ℃ aannemen, 1 ~ 5 minuten snelle warme start.
2.Het systeem is zeer aanpasbaar, met een hogere specificiteit en gevoeligheid.
3.Bij normale PCR kan het een grotere hoeveelheid product verkrijgen, en bij kwantitatieve fluorescentie-PCR kan het de normalisatie van de amplificatiecurve en de fluorescentiewaarde van de matrijs met een zeer lage concentratie verbeteren.Geschikt voor gebruik als PCR-detectiereagens met hoge gevoeligheid.
4.en kan worden gebruikt in multiplex PCR-amplificatiereacties.
5.5′ → 3 ′ polymeraseactiviteit, 5 ′ → 3 ′ exonucleaseactiviteit;geen 3′ → 5 ′ exonuclease-activiteit;geen proefleesfunctie.
6.Geschikt voor kwalitatieve en kwantitatieve testen van PCR en RT-PCR.
7.Het 3'-uiteinde van het PCR-product is A, dat direct in een T-vector kan worden gekloneerd.
8.De driestapsmethode wordt aanbevolen voor primers met lage annealingstemperaturen of voor amplificatie van fragmenten langer dan 200 bp.
