Multiplex éénstaps RT-qPCR-premix
Beschrijving
Cat.nr.: HCR5141A
Multiplex One Step RT-qPCR Premix is een multiplex kwantitatieve PCR-kit op basis van RNA als sjabloon.In het experiment worden reverse transcriptie en kwantitatieve PCR uitgevoerd in dezelfde reageerbuis, waardoor de experimentele werking wordt vereenvoudigd en het risico op besmetting wordt verminderd.Het unieke ontwerp van de buffer en het enzymmengsel kan worden gebruikt in een gevriesdroogd systeem in één stap.De kit maakt gebruik van hittebestendige reverse transcriptase voor efficiënte synthese van cDNA uit de eerste streng, met behulp van hotstart Taq DNA-polymerase voor kwantitatieve amplificatie.Het bevat geoptimaliseerde reactiebuffer, enzymenmix enz., en factoren die niet-specifieke PCR-amplificatie effectief remmen en de amplificatie-efficiëntie van meerdere qPCR-reacties verbeteren, werden toegevoegd, waardoor kwantitatieve amplificatie van meerdere fluorescentie mogelijk wordt terwijl de amplificatie-efficiëntie van primers wordt gewaarborgd.
Componenten
| Naam |
| 1. Lyo-buffer |
| 2. Lyo-enzymmengsel |
| 3. Lyo-beschermer |
Transportconditieion
A: Lyo-buffer en beschermer: -25 ~ -15 ℃, houdbaarheid is 1 jaar.
B: Lyo-enzymmix, 2-8 ℃, houdbaarheid is 6 maanden.
Instructies voor bediening
1. Reactiesysteem (neem 25μL als voorbeeld)
| Componenten | Volume (μl) | Laatste concentratie |
| Lyo-buffer | 6 | 1* |
| Lyo-enzymmengsel | 1 | - |
| Lyo-beschermer | 8 | - |
| Primermix (10 μM) | 1 | 0,1- 1uM |
| Sondemix (10 μM) | 0,5 | 0,05-0,5 uM |
| RNA-sjabloon | 5 | - |
| DEPC H2O | Tot 25 | - |
2. Geoptimaliseerd fietsprotocol
1) Standaard fietsprotocol
| Reactie fase | Temperatuur | Tijd | Fiets | |
| 1 | Omgekeerde transcriptie | 50°Ca | 10 minuten | 1 |
| 2 | Initiële denaturatie | 95°C | 5 minuten | 1 |
| 3 | Amplificatie reactie | 95°C | 15sec | 45 cycli |
| 60°Cb | 30secc |
2) Snel fietsprotocol
|
| Reactie fase | Temperatuur | Tijd | Fiets |
| 1 | Omgekeerde transcriptie | 50°Ca | 2 minuten | 1 |
| 2 | Initiële denaturatie | 95°C | 2 seconden | 1 |
| 3 | Amplificatie reactie | 95°C | 1 seconde |
45 cycli |
| 60°Cb | 13secc |
Opmerking:
a) Achteruit transcriptie: De temperatuur kan 42°C of 50°C selecteren gedurende 10-15 minuten.
b) Amplificatie reactie: De temperatuur wordt aangepast volgens de Tm-waarde van de ontworpen primers.
C)Fluorescentie signaal acquisitie: Stel de experimentele procedure in volgens de vereisten van deinstrumenthandleiding.
Technische informatie/specificaties
| Goede start | Ingebouwde hotstart |
| Detectiemethode | Primer-sonde-detectie |
| PCR-methode | Eénstaps RT-qPCR |
| Soort monster | RNA |
Opmerkingen
1. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
2. Draag de nodige PBM's, zoals een laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen！
