Ultra-nuclease
UltraNuclease is een genetisch gemanipuleerde endonuclaese afgeleid van Serratia marcescens, die in staat is DNA of RNA af te breken, dubbel- of enkelstrengs, lineair of circulair onder een breed scala aan omstandigheden, en nucleïnezuren volledig afbreekt tot 5'-monofosfaatoligonucleotiden met een lengte van 3-5 basen .Na genetische modificatie werd het product gefermenteerd, tot expressie gebracht en gezuiverd in Escherichia coli (E. coli), wat de viscositeit van celsupernatant en cellysaat in wetenschappelijk onderzoek vermindert, maar ook de zuiveringsefficiëntie en het functionele onderzoek van eiwitten verbetert.Het kan ook worden gebruikt in de gentherapie, viruszuivering, vaccinproductie, eiwit- en polysaccharide-farmaceutische industrie als reagens voor de verwijdering van nucleïnezuurresten.
Producteigenschappen
| CAS-nr. | 9025-65-4 |
| EG-nr. | |
| Moleculair gewicht | 30 kDa |
| ISO-elektrisch punt | 6,85 |
| Eiwitzuiverheid | ≥99% (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Specifieke activiteit | ≥1.1×106E/mg |
| Optimale temperatuur | 37°C |
| Optimale pH-waarde | 8,0 |
| ProteaseActiviteit | negatief |
| Biobelasting | <10 CFU/100.000 U |
| Residueel gastheerceleiwit | ≤10 ppm |
| Zwaar metaal | ≤10 ppm |
| Bacterieel endotoxine | <0,25EU/1000U |
| Opslagbuffer | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glycerol |
Opslag condities
≤0°C transport; -25~-15°C Opslag, 2 jaar geldig (vermijd bevriezen-ontdooien).
Eenheidsdefinitie
De hoeveelheid enzym die werd gebruikt om de absorptiewaarde van △A260 binnen 30 minuten bij 37 °C, pH 8,0 met 1,0 te veranderen, wat overeenkomt met verteerd 37 μg zalmsperma-DNA door in oligonucleotiden te knippen, werd gedefinieerd als een actieve eenheid (U).
Kwaliteitscontrole
Residueel gastheerceleiwit: ELISA-kit
•Protease Residuen: 250KU/ml UltraNuclease reageerde gedurende 60 minuten met substraat, er werd geen activiteit gedetecteerd.
•Bacterieel endotoxine: LAL-Test, Farmacopee van de Volksrepubliek China Deel 4 (editie 2020) gellimiettestmethode.Algemene regels (1143).
•Biobelasting: Farmacopee van de Volksrepubliek China Deel 4 (editie 2020) – Algemeen
Regels voor steriliteitstests (1101), PRC National Standard, GB 4789.2-2016.
•Zwaar metaal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operatie
De UltraNuclease-activiteit werd significant geremd wanneer de SDS-concentratie hoger was dan 0,1% of EDTA
concentratie was meer dan 1 mM. Oppervlakteactieve stof Triton X-100, Tween 20 en Tween 80 hadden geen effect op nuclease
eigenschappen wanneer de concentratie minder dan 1,5% was.
| Operatie | Optimale werking | Geldige bewerking |
| Temperatuur | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mm | 1- 15 mM |
| DTT | 0- 100 mM | >100mM |
| 2-Mercapto-ethanol | 0- 100 mM | >100mM |
| Eenwaardig metaalion (Na+, K+ enz.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0- 10 mM | 0- 100 mM |
Gebruik en dosering
• Verwijder exogeen nucleïnezuur uit vaccinproducten, verminder het risico op resterende nucleïnezuurtoxiciteit en verbeter de productveiligheid.
• Verlaag de viscositeit van voedingsvloeistof veroorzaakt door nucleïnezuur, verkort de verwerkingstijd en verhoog de eiwitopbrengst.
• Verwijder het nucleïnezuur dat het deeltje omhult (virus, insluitingslichaampje, etc.), wat bevorderlijk is
tot het vrijkomen en zuiveren van het deeltje.
| Experimenteel type | Eiwitproductie | Virus, vaccin | Celmedicijnen |
| Aantal cellen | 1g cel nat gewicht (opnieuw gesuspendeerd met 10 ml buffer) | 1L fermentatie vloeibare supernatant | 1L cultuur |
| Minimale dosering | 250U | 100U | 100U |
| Aanbevolen dosering | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nucleasebehandeling kan de resolutie en het herstel van het monster voor kolomchromatografie, elektroforese en blotting-analyse verbeteren.
• Bij gentherapie wordt nucleïnezuur verwijderd om gezuiverde adeno-geassocieerde virussen te verkrijgen.
