BsaI
BsaI, een IIs-restrictie-endonuclease-restrictie-endonuclease, is afgeleid van een arecombinante E. coli-stam die het gekloonde en gemodificeerde BsaI-gen van Bacillus stearothermophilus draagt. Deze hebben dezelfde specificiteit als natuurlijk enzym en hebben verminderde steractiviteit.De herkenningssequentie en splitsingsplaatsen zijn als volgt:
5'······GGTCTC(N)············3'
3'······CCAGAG(NNNNN)···5'
Componenten
BsaI(20U/μL), 10xBsaI-buffer
Opslag
Bewaren bij -25℃~-15℃, geldig gedurende 1 jaar (vermijd herhaalde vries-dooicycli).
Opslagbuffer
10 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM DTT, 0,1 mM EDTA, 200 µg/ml recombinant albumine, 50% glycerol.(pH 7,4 @ 25°C).
Producteigenschappen
Hoge activiteit, snelle spijsvertering;
1. Lage steractiviteit, waardoor nauwkeurig snijden als "scalpel" wordt gegarandeerd;
2. Zonder BSA en vrij van dierlijke oorsprong.
Methyleringsgevoeligheid
Dammethylering: niet gevoelig;
Dcm-methylatie: verminderd door sommige combinaties van overlapping;
CpG-methylering: geblokkeerd door enkele combinaties van overlappingen.
Eenheidsdefinitie
Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om 1 µg DNA voor interne controle in 1 uur bij 37 °C te verteren in een totaal reactievolume van 50 µl.
Kwaliteitscontrole
Eiwitzuiverheidstest (SDS-PAGE): De zuiverheid van Bsa I was ≥ 95%, bepaald door SDS-PAGE-analyse met behulp van Coomassie Blue-detectie.
RNase:20 U Bsa I met 1,6 μg MS2 RNA gedurende 16 uur bij 37 °C levert klierafbraak op, zoals bepaald door agarosegelelektroforese.
Niet-specifieke DNase-activiteit:20 U BsaI met 1 μg PhiX174 DNA gedurende 16 uur bij 37 ℃ levert geen overmaat DNA op, zoals bepaald door agarosegelelektroforese.
Ligatie en hersnijden:Na vertering van 1 μg
E.coli-DNA:2Uvan VacciniavirusCapping Enzym wordt gescreend op de aanwezigheid van genomisch DNA van E. coli met behulp van TaqManqPCR met primers die specifiek zijn voor de E. coli 16S rRNA-locus.De genomische DNA-besmetting van E. coli is ≤1 E. coli-genoom.
BacterieelEndotoxine:LAL-test, volgens de Chinese FarmacopeeIV editie 2020, gellimiettestmethode, algemene regel (1143).Het bacteriële endotoxinegehalte moet ≤10 EU/mg zijn.
Reactiesysteem en omstandigheden
| Onderdeel | Volume |
| BsaI (20 U/μL) | 1μl |
| DNA | 1μg |
| 10 x BsaI-buffer | 5μl |
| dd H2O | Tot 50 μl |
Incubeer bij 37°C gedurende 15-30 minuten.Warmte-inactivatie: 80°C gedurende 20 minuten.
Het aanbevolen reactiesysteem en de aanbevolen omstandigheden kunnen een relatief goed enzymverteringseffect opleveren. Dit dient uitsluitend ter referentie. Raadpleeg de experimentele resultaten voor details.
Toepassingen
Beperking EnzymverteringSnelle klonering.
Opmerkingen over gebruik
1. Het enzymvolume ≤ 1/10 van het reactievolume.
2. Steractiviteit kan optreden als de glycerolconcentratie meer dan 5% bedraagt.
3. Er kan splijtingsactiviteit optreden als het substraat onder de aanbevolen verhouding ligt.
