Temperatuurgevoelige UNG
Temperatuurgevoelige UNG (TS-UNG) wordt verkregen door recombinante expressie in E. coli.Het enzym katalyseert de afgifte van vrij uracil uit uracilhoudend enkel- en dubbelstrengs DNA en is inactief tegen RNA.Vergeleken met het conventionele UNG-enzym van E. coli-genoorsprong heeft het TS-UNG-enzym een hogere activiteit bij lage temperaturen (20℃~37℃) en is het temperatuurgevoelig en gemakkelijk geïnactiveerd (50℃), waardoor de afbraak van dUTP-bevattende amplificatie wordt vermeden producten bij kamertemperatuur door de resterende activiteit die kan achterblijven na inactivatie van het conventionele UNG-enzym.Daarom is het TS-UNG-enzym niet alleen geschikt voor PCR-contaminatiepreventiereacties, maar past het ook goed bij het RT-PCR-amplificatieprogramma en kan het worden gebruikt bij RT-PCR-contaminatiepreventiereacties.
Aanbevolen toepassing
Versterking van besmettingspreventie
Opslag condities
-20°C voor langdurige opslag, goed mengen vóór gebruik, veelvuldig invriezen en ontdooien vermijden.
Opslagbuffer
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilisator, 50% glycerol.
Eenheidsdefinitie
De hoeveelheid enzym die nodig is om 1 µg enkelstrengs DNA dat dU-basen bevat, in 1 uur bij 37°C af te breken, is 1 eenheid activiteit (U).
Kwaliteitscontrole
1.SDS-PAGE elektroforetische zuiverheid groter dan 98%
2.Afbraakactiviteit, batch-tot-batch controle, stabiliteit
3.Geen exogene nuclease-activiteit, geen exogene endonuclease- of exonuclease-verontreiniging.
Instructies
| Componenten | Volume (μl) | Eindconcentratie |
| 10 × PCR-buffer (dNTP-vrij, Mg²+vrij) | 5 | 1× |
| dUTP's (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (vervangt dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μl | 1-4 mM |
| 5 E/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5U) |
| 25 × PrimermixA | 2 | 1× |
| Sjabloon | - | <1μg/reactie |
| ddH₂O | Tot 50 | - |
Opmerking: a: Indien gebruikt voor qPCR/qRT-PCR, moet de fluorescerende probe aan het reactiesysteem worden toegevoegd.Gewoonlijk kan een uiteindelijke primerconcentratie van 0,2 μM goede resultaten opleveren;wanneer de reactieprestaties slecht zijn, kan de primerconcentratie worden aangepast binnen het bereik van 0,2-1 μM.Gewoonlijk wordt de sondeconcentratie geoptimaliseerd in het bereik van 0,1-0,3 μM.Concentratiegradiëntexperimenten kunnen worden uitgevoerd om de beste combinatie van primer en probe te vinden.
Opmerkingen
1.De optimale reactietemperatuur van TS-UNG-enzym is relatief laag en kan worden geoptimaliseerd in het bereik van 20 ℃ ~ 37 ℃, de dosering van het enzym en de reactietijd kunnen worden geoptimaliseerd in het bereik van 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 minuten;en het enzym kan worden geïnactiveerd tijdens het proces van omgekeerde transcriptie.
2.Het is geschikt voor PCR en RT-PCR om besmetting te voorkomen.
3.Vermijd veelvuldig bevriezen en ontdooien en stel niet bloot aan grote temperatuurschommelingen.
4.Verschillende te versterken genen hebben een verschillende benuttingsefficiëntie van dUTP en gevoeligheid voor het UNG-enzym. Als het gebruik van het UNG-systeem leidt tot een afname van de detectiegevoeligheid, moet het reactiesysteem daarom worden aangepast en geoptimaliseerd. Als u technische ondersteuning nodig heeft, neem dan contact op met ons bedrijf.
