Bst 2.0 DNA-polymerase (glycerolvrij)
Bst DNA-polymerase V2 is afgeleid van Bacillus stearothermophilus DNA-polymerase I, dat 5′ → 3 ′ DNA-polymerase-activiteit en sterke ketenvervangingsactiviteit heeft, maar geen 5 ′ → 3 ′ exonuclease-activiteit.Bst DNA Polymerase V2 is bij uitstek geschikt voor strengverplaatsing, isotherme amplificatie LAMP (Loop mediated isothermal amplification) en snelle sequencing.
Componenten
| Onderdeel | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2 (glycerolvrij) (8U/μL) | 0,2 ml | 1 ml | 10 ml |
| 10×HC Bst V2-buffer | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 3×10 ml |
| MgSO4(100mM) | 1,5 ml | 2×1,5 ml | 2×10 ml |
Toepassingen
1.LAMP isotherme versterking
2. Enkele verplaatsingsreactie van de DNA-streng
3. Hoge GC-gensequencing
4.DNA-sequencing op nanogramniveau.
Opslag condities
Transport onder 0°C en opgeslagen bij -25°C~-15°C.
Eenheidsdefinitie
Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 25 nmol dNTP in 30 minuten bij 65°C in zuuronoplosbaar materiaal opneemt.
Kwaliteitscontrole
1.Eiwitzuiverheidstest (SDS-PAGE):De zuiverheid van Bst-DNA-polymerase V2 is ≥99%, bepaald door SDS-PAGE-analyse met behulp van Coomassie Blue-detectie.
2.Exonuclease-activiteit:Incubatie van een reactie van 50 μl die minimaal 8 U Bst DNA-polymerase V2 bevat met 1 μg λ -Hind Ⅲ verteren DNA gedurende 16 uur bij 37 ℃ resulteert in geen detecteerbare afbraak zoals bepaald.
3.Nickase-activiteit:Incubatie van een reactie van 50 μl die minimaal 8 U Bst-DNA-polymerase V2 bevat met 1 μg pBR322-DNA gedurende 16 uur bij 37 °C resulteert in geen detecteerbare afbraak, zoals bepaald.
4.RNase-activiteit:Incubatie van een reactie van 50 μl met minimaal 8 U Bst-DNA-polymerase V2 met 1,6 μg MS2-RNA gedurende 16 uur bij 37 °C resulteert in geen detecteerbare afbraak, zoals bepaald.
5.E. coli-DNA:120 E Bst-DNA-polymerase V2 wordt gescreend op de aanwezigheid van genomisch DNA van E. coli met behulp van TaqMan qPCR met primers die specifiek zijn voor de E. coli 16S rRNA-locus.De genomische DNA-besmetting van E. coli is ≤1 kopie.
LAMP-reactie
| Componenten | 25μl |
| 10×HC Bst V2-buffer | 2,5 μl |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μl |
| dNTP's (elk 10 mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Groen (25×)a | 1,0 μl |
| Primermixb | 6 μl |
| Bst DNA-polymerase V2 (glycerolvrij) (8 U/uL) | 1 μl |
| Sjabloon | × μl |
| ddH₂O | Tot 25 μl |
Opmerkingen:
1) een.SYTOTM 16 Groen (25×): Afhankelijk van de experimentele behoeften kunnen andere kleurstoffen als vervanging worden gebruikt;
2) b.Primermengsel: verkregen door het mengen van 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB en andere volumes.
Reactie en toestand
1 × HC Bst V2-buffer, de incubatietemperatuur ligt tussen 60°C en 65°C.
Warmte-inactivatie
80 °C, 20 minuten
