Wild Taq DNA-polymerase
Taq DNA Polymerase is een thermostabiel DNA-polymerase van Thermus Aquaticus YT-1, dat een 5' → 3'-polymerase-activiteit en een 5'-flap-endonuclease-activiteit bezit.
Componenten
| Onderdeel | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq-buffer | 2×1 ml | 2×10 ml | 2×50 ml | 5×200 ml |
| Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 0,1 ml | 1 ml | 5 ml | 5×10 ml |
Opslag condities
Transport onder 0°C en opgeslagen bij -25°C~-15°C.
Eenheidsdefinitie
Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 15 nmol dNTP in 30 minuten bij 75°C in zuuronoplosbaar materiaal opneemt.
Kwaliteitscontrole
1.Eiwitzuiverheidstest (SDS-PAGE):De zuiverheid van Taq DNA-polymerase was ≥95%, bepaald door SDS-PAGE-analyse.
2.Endonuclease-activiteit:Een minimum van 5 U Taq DNA-polymerase met 1 μg λDNA gedurende 16 uur bij 37 ℃ resulteert in geen detecteerbare afbraak zoals bepaald.
3.Exonuclease-activiteit:Een minimum van 5 U Taq DNA-polymerase met 1 μg λ-Hind Ⅲ verteren DNA gedurende 16 uur bij 37 ℃ resulteert in geen detecteerbare afbraak zoals bepaald.
4.Nickase-activiteit:Een minimum van 5 U Taq DNA-polymerase met 1 μg pBR322-DNA gedurende 16 uur bij 37°C resulteert in geen detecteerbare afbraak, zoals bepaald.
5.RNase-activiteit:Een minimum van 5 U Taq DNA-polymerase met 1,6 μg MS2 RNA gedurende 16 uur bij 37°C resulteert in geen detecteerbare afbraak, zoals bepaald.
6.E coliDNA:5 U Taq DNA-polymerase wordt gescreend op de aanwezigheid van genomisch DNA van E. coli met behulp van TaqMan qPCR met primers die specifiek zijn voor de E. coli 16S rRNA-locus.De genomische DNA-besmetting van E. coli is ≤1 kopie.
7.PCR-amplificatie (5,0 kb Lambda-DNA)- Een reactie van 50 µl met 5 ng Lambda-DNA met 5 eenheden Taq DNA-polymerase voor 25 cycli PCR-amplificatie resulteert in het verwachte product van 5,0 kb.
Reactie-opstelling
| Componenten | Volume |
| Sjabloon-DNAa | optioneel |
| 10 μM voorwaartse primer | 1 μl |
| 10 μM omgekeerde primer | 1 μl |
| dNTP-mix (elk 10 mM) | 1 μl |
| 10×Taq-buffer | 5 μl |
| Taq DNA-polymeraseB | 0,25 μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
Opmerkingen:
1) De optimale reactieconcentratie van verschillende sjablonen is verschillend.De volgende tabel toont het aanbevolen sjabloongebruik van een reactiesysteem van 50 µl.
| DNA | Hoeveelheid |
| Genomisch | 1 ng-1 μg |
| Plasmide of viraal | 1 pg-1 ng |
2) De optimale concentratie van Taq DNA-polymerase kan variëren van 0,25 µL~1 µL in gespecialiseerde toepassingen.
ReactieProgramma
| Stap | Temperatuur(°C) | Tijd | Cycli |
| Initiële denaturatiea | 95 ℃ | 5 mins | - |
| Denaturatie | 95 ℃ | 15-30 sec | 30-35 cycli |
| GloeienB | 60 ℃ | 15 sec | |
| Verlenging | 72 ℃ | 1 kb/min | |
| Laatste verlenging | 72 ℃ | 5 mins | - |
Opmerkingen:
1) De initiële denaturatieconditie is geschikt voor de meeste amplificatiereacties en kan worden aangepast afhankelijk van de complexiteit van de templatestructuur.Als de sjabloonstructuur complex is, kan de pre-denaturatietijd worden verlengd tot 5 – 10 minuten om het initiële denaturatie-effect te verbeteren.
2) De uitgloeitemperatuur moet worden aangepast aan de Tm-waarde van de primer, die doorgaans 3 ~ 5 ℃ lager is ingesteld dan de Tm-waarde van de primer;Voor complexe templates is het noodzakelijk om de gloeitemperatuur aan te passen en de verlengingstijd te verlengen om efficiënte amplificatie te bereiken.
