Reagens voor monstervrijgave
Monstervrijgavereagens is bedoeld voor moleculaire POCT-diagnostische scenario's.Voor de twee systemen van directe amplificatie LAMP en directe amplificatie PCR is er geen noodzaak voor nucleïnezuurextractie.Het ruwe lysaat van het monster kan direct worden geamplificeerd, het doelgen kan nauwkeurig worden gedetecteerd en de detectietijd van het monster kan verder worden verkort, wat perfect aansluit bij de toepassingsvereisten van moleculaire POCT.Het is geschikt voor neusuitstrijkjes, keeluitstrijkjes en andere soorten monsters.De verwerkte monsters kunnen direct worden gebruikt voor realtime fluorescentie-kwantitatieve PCR- of LAMP-detectie, en dezelfde resultaten als conventionele extractiemethoden kunnen worden bereikt zonder ingewikkelde nucleïnezuurextractiebewerkingen.
Opslag condities
Transporteren en bewaren bij kamertemperatuur.
Kwaliteitscontrole
Functionele detectie – kwantitatieve qPCR: Het 800 μl Sample Release Reagent-systeem werd versterkt
met 1000 kopieën van het nieuwe pseudovirus, één neusuitstrijkje, resulterend in vergelijkbare amplificatiecurven enΔCt-waarden binnen ± 0,5 Ct.
Experimentele procedureres
1. Neem 800 μl monstervrijgavereagens en verdeel de lyse-oplossing in een monsterbuisje van 1,5 ml
2. Neem het neusuitstrijkje of het keeluitstrijkje met het wattenstaafje; Bemonsteringsprocedure voor het neusuitstrijkje: neem het steriele wattenstaafje en plaats het in de neusgaten, ga langzaam verder tot ongeveer 1,5 cm diep, draai voorzichtig 4 keer tegen het neusslijmvlies gedurende meer dan 15 seconden Herhaal vervolgens dezelfde handeling op de andere neusholte met hetzelfde wattenstaafje. Bemonsteringsprocedure met een keeluitstrijkje: neem het steriele wattenstaafje en veeg voorzichtig de keelamandelen en de achterste keelholtewand 3 keer af.
3.Plaats het wattenstaafje onmiddellijk in het bemonsteringsbuisje.De kop van het wattenstaafje moet ten minste 30 seconden worden gedraaid en in de bewaaroplossing worden gemengd om ervoor te zorgen dat het monster volledig in het bemonsteringsbuisje wordt geëlueerd.
4. Incubatie bij kamertemperatuur (20 ~ 25 ℃) gedurende 1 minuut, de bereiding van de lysisbuffer is voltooid.
5. Zowel de RT-PCR als de RT-LAMP van 25 μl waren compatibel met een hoeveelheid template-toevoeging van 10 μl voor detectie-experimenten.
Opmerkingen
1. De minimale hoeveelheid direct monsterlysaat die overeenkomt met een enkel wattenstaafje kan worden aangepast tot 400 μl, wat kan worden aangepast aan de testbehoeften.
2. Zodra het monster door het monstervrijgavereagens is verwerkt, wordt aanbevolen om de volgende testfase zo snel mogelijk uit te voeren; de intervalwachttijd bedraagt bij voorkeur minder dan 1 uur.
3. De pH van het monsterlysaat is zuur en het detectiesysteem moet een bepaalde buffer hebben.Het is geschikt voor de meeste PCR-, RT-PCR- en LAMP-fluorescentiedetectie met pH-buffer, maar niet geschikt voor LAMP-colorimetrische detectie zonder buffer.
