RT-LAMP Fluorescerende mastermix
Dit product bevat reactiebuffer, RT-Enzymes Mix (Bst DNA-polymerase en hittebestendig reverse transcriptase), gelyofiliseerde beschermstoffen enfluorescerendkleurstof componenten.De reactiebuffer bevat Mg2+, dNTP en andere noodzakelijke componenten voor amplificatie.Om te gebruiken, mengt u gewoon de buffer, het reactie-enzym, de fluorescerende kleurstof en de primer en voegt u de sjabloon toe. Het toevoegen van gelyofiliseerde beschermer kan direct worden gebruikt.Het werd aangesloten op een lyofilisator en gelyofiliseerd, en alleen de primers en sjablonen werden toegevoegd wanneer ze werden gebruikt.Dit reagens heeft een hoge amplificatie-efficiëntie en gevoeligheid.
Onderdeel
| Onderdeel | HCB5205A-01 | HCB5205A-02 | HCB5205A-03 |
| Lusgemedieerde versterkingsbuffer | 1,2 ml | 4 ml×3 | 12 ml×10 |
| RT-Enzymenmix | 245 μl | 2,45 ml | 2,45 ml×10 |
| Gevriesdroogde beschermer | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
| 25× Kleurstof | 192 μl | 0,96 ml×2 | 0,96 ml×20 |
Toepassingen
Voor isotherme amplificatie van DNA of RNA.
Opslag condities
Vervoerd met droogijs, opgeslagen bij -25 ~ -15 ℃.Vermijd veelvuldig invriezen en ontdooien, het product is 12 maanden geldig.
Protocol
1.Ontdooi de te gebruiken reactiebuffer bij kamertemperatuur.Vortex de buizen kort of keer ze meerdere keren om om ze grondig te mengen. Centrifugeer vervolgens om de vloeistof naar de bodem van de buis te verzamelen.
2.Bereiding van reactiesysteem.Dit reagens kan worden bereid in twee reactiesystemen: een vloeibaar reactiemengsel en een gelyofiliseerd systeemmengsel.
1) Bereid het vloeibare reactiemengsel voor
| Onderdeel | Volume |
| Lusgemedieerde versterkingsbuffer | 12,5 μl |
| 25× Kleurstof | 2 μl |
| RT-Enzymenmix | 2,55 μl |
| 10 × Primermixa | 5 μl |
| Sjablonen DNA/RNA b | × μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
2) Lyofilisatiesysteemmix
① Bereid het gelyofiliseerde mengsel voor
| Onderdeel | Volume |
| Lusgemedieerde versterkingsbuffer | 12,5 μl |
| Gevriesdroogde beschermer | 20 μl |
| 25× Kleurstof | 2 μl |
| RT-Enzymenmix | 2,55 μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
② Lyofilisatie: het bereide mengsel werd gevriesdroogd in een systeem van 50 μl
③ Bereid het reactiemengsel voor
| Onderdeel | Volume |
| Gevriesdroogde mix | 1 stuk |
| 10 × Primermixa | 5 μl |
| Sjablonen DNA/RNA b | × μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
Opmerkingen:
1) een.10×Primermix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Lus F/B;
2) b.DEPC (wateroplosbaar) wordt aanbevolen voor nucleïnezuurtempl.
3)Amplificatiereactie: Stel het volgende programma in op een fluorescerend PCR-instrument (bijv. ABI7500, enz.):
| Temperatuur | Tijd | Cirkels |
| 65 ℃ | 60 sec *verzamel FAM-fluorescentie | 30 |
Opmerkingen
1.Zout kan op de bodem van de bufferbuis verschijnen, kort vortexen of de buizen meerdere keren omkeren om grondig te mengen bij kamertemperatuur.
2.De reactietemperatuur kan worden geoptimaliseerd tussen 62 ℃ en 68 ℃, afhankelijk van de staat van de primers.
3.Het experiment moet worden gestandaardiseerd, inclusief de voorbereiding van het reactiesysteem, lyofilisatie, monsterverwerking en monstertoevoegingsproces;
4.Om contaminatie te voorkomen, wordt aanbevolen om het reactiesysteem op een ultraschone werkbank voor te bereiden, in andere gevallen. Voeg sjablonen toe aan de zuurkast van de kamer om vals-positieve interferentie te voorkomen.
