Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) is een enkelstrengs polypeptide dat 4 disulfidebindingen bevat met een molecuulgewicht van ongeveer 13,7 kDa.RNase A is een endoribonuclease dat specifiek enkelstrengs RNA op C- en U-residuen afbreekt.Concreet herkent de splitsing de fosfodiësterbinding gevormd door de 5'-ribose van een nucleotide en de fosfaatgroep op de 3'-ribose van het aangrenzende pyrimidine-nucleotide, zodat de 2, 3'-cyclische fosfaten worden gehydrolyseerd tot de overeenkomstige 3'-ribose. 'nucleosidefosfaten (bijv. pG-pG-pC-pA-pG wordt gesplitst door RNase A om pG-pG-pCp en A-PG te genereren).RNase A is het meest actief bij het splitsen van enkelstrengs RNA.De aanbevolen werkconcentratie is 1-100μG/ml, compatibel met verschillende reactiesystemen.Een lage zoutconcentratie (0-100 mM NaCl) kan worden gebruikt voor het knippen van enkelstrengs RNA, dubbelstrengs RNA en RNA-ketens gevormd door RNA-DNA-hybridisatie.Bij een hoge zoutconcentratie (≥0,3 M) splitst RNase A echter alleen specifiek enkelstrengs RNA.
RNase A wordt meestal gebruikt om RNA te verwijderen tijdens de bereiding van plasmide-DNA of genomisch DNA. Of DNase al dan niet actief is tijdens het bereidingsproces, kan de reactie gemakkelijk beïnvloeden.De traditionele methode van koken in een waterbad kan worden gebruikt om de DNase-activiteit te inactiveren.Dit product bevat geen DNase en protease en vereist geen warmtebehandeling vóór gebruik.Bovendien kan dit product ook worden gebruikt in experimenten in de moleculaire biologie, zoals RNase-beschermingsanalyse en RNA-sequentieanalyse.
Opslag condities
Het product kan worden bewaard bij -25~-15℃, 2 jaar geldig.
Instructies
Dit is een van de gebruikelijke methoden voor het bereiden van RNase A-opslagoplossing.Het kan ook worden bereid doorandere methoden volgens de traditionele methoden in het laboratorium of de referentieliteratuur (zoalsdirect oplossend in 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 of Tris-NaCl-oplossing)
1. Gebruik 10 mM natriumacetaat (pH 5,2) om 10 mg/ml RNase A-bewaaroplossing te bereiden
2. Verwarmen op 100 ℃ gedurende 15 minuten
3. Koel af tot kamertemperatuur, voeg 1/10 volume 1 M Tris-HCl (pH 7,4) toe en stel de pH in op 7,4 (voorvoeg bijvoorbeeld 500 ml 10 g/ml RNase-bewaaroplossing 1M Tris-HCL, PH7.4 toe)
4. Subverpakt bij -20℃ voor bevroren opslag, die tot 2 jaar stabiel kan blijven.
[Opmerkingen]: Wanneer de RNaseA-oplossing onder neutrale omstandigheden wordt gekookt, zal er RNase-precipitatie ontstaan;Kook het bij een lagere pH en als er neerslag optreedt, kan dit worden waargenomen, wat kan worden veroorzaakt door de aanwezigheid van eiwitonzuiverheden.Als er na het koken sediment wordt aangetroffen, kunnen de onzuiverheden worden verwijderd door middel van centrifugatie op hoge snelheid (13.000 tpm) en vervolgens worden verpakt voor opslag in de vriezer.
Productinformatie
| Synoniemen | Ribonuclease I;Pancreasribonuclease;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS-nr. | 9001-99-4 |
| Verschijning | Wit gevriesdroogd poeder |
| Moleculair gewicht | ~ 13,7 kDa (aminozuursequentie) |
| PH waarde | 7,6 (activiteitsbereik 6-10) |
| Geschikte temperatuur | 60℃ (Activiteitsbereik 15-70℃) |
| Activerend middel | Na2+.K+ |
| Remmer | Rnase-remmer |
| Inactiveringsmethode | Kan niet worden geïnactiveerd door verwarming, er wordt voorgesteld een centrifugekolom te gebruiken |
| Oorsprong | Runderen |
| Oplosbaarheid | Oplosbaar in water (10 mg/ml) |
| Verlies op droog | ≤5,0% |
| Enzymatische activiteit | ≥60 Kunitz-eenheden/mg |
| ISO-elektrisch punt | 9.6 |
Opmerkingen
Voor uw veiligheid en gezondheid dient u tijdens het gebruik laboratoriumjassen en wegwerphandschoenen te dragen.
