Rnase-remmer (glycerolvrij)
Muriene RNase-remmer is een recombinante muizen-RNase-remmer, tot expressie gebracht en gezuiverd uit E.coli.Het bindt zich aan RNase A, B of C in een verhouding van 1:1 door middel van niet-covalente binding, waardoor de activiteit van de drie enzymen wordt geremd en RNA tegen afbraak wordt beschermd.Het is echter niet effectief tegen RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H of RNase van Aspergillus.Muizen-RNase-remmer werd getest met RT-PCR, RT-qPCR en IVT-mRNA en was compatibel met verschillende commerciële reverse-transcriptasen, DNA-polymerasen en RNA-polymerasen.
Vergeleken met menselijke RNase-remmers bevat muizen-RNase-remmer geen twee cysteïnen die zeer gevoelig zijn voor oxidatie die inactivatie van de remmer veroorzaakt.Dat maakt het stabiel bij lage concentraties DTT (minder dan 1 mM).Deze eigenschap maakt het geschikt voor gebruik bij reacties waarbij hoge concentraties DTT de reactie nadelig beïnvloeden (bijv. Real-time RT-PCR).
Atoepassing
Dit product kan op grote schaal worden gebruikt in elk experiment waarbij RNase-interferentie mogelijk is om RNA-degradatie te voorkomen, zoals:
1. Eerste-streng cDNA-synthese, RT-PCR, RT-qPCR, enz.;
2. RNA beschermen tegen afbraak bij in vitro transcriptie/translatie (bijvoorbeeld virale replicatie in vitro);
3. Remming van RNase-activiteit tijdens RNA-isolatie en -zuivering.
Opslag condities
Bewaren bij -25~-15℃;
Vries-dooicycli ≤ 5 keer;
Geldig voor 1 jaar.
Eenheidsdefinitie
Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid RNase-remmer die nodig is om de activiteit van 5 ng RNase A met 50% te remmen.
Moleculair gewicht
RNase-remmer (glycerolvrij) is een eiwit van 50 kDa.
Kwaliteitscontrole
Exonuclease Activiteit:
Incubatie van 40 U enzym met 1 µg λ-Hind III-digest-DNA gedurende 16 uur bij 37°C resulteerde in geen detecteerbare afbraak van het DNA, zoals bepaald door gelelektroforese.
Endonuclease-activiteit:
Incubatie van 40 U enzym met 1 μg λ DNA gedurende 16 uur bij 37°C resulteerde in geen detecteerbare afbraak van het DNA, zoals bepaald door gelelektroforese.
Nickeren Activiteit:
Incubatie van 40 U enzym met 1 μg pBR322 gedurende 16 uur bij 37°C resulteerde in geen detecteerbare afbraak van het DNA, zoals bepaald door gelelektroforese.
RNase Activiteit:
Incubatie van 40 U enzym met 1,6 μg MS2 RNA gedurende 4 uur bij 37°C resulteerde in geen detecteerbare afbraak van het RNA, zoals bepaald door gelelektroforese.
E.coli-DNA:
40 U enzym wordt gedetecteerd door TaqMan qPCR.Het E.coli-DNA is ≤ 0,1 pg/40U.
Nnoots
1. Schud of roer niet heftig om enzyminactivatie te voorkomen.
2.RNase-remmer is actief bij temperaturen van 25 ℃ tot 55 ℃ en wordt geïnactiveerd bij ≥65 ℃.
3. De activiteit van RNase H, RNase 1 en RNase T1 wordt niet geremd.
4. Het pH-bereik voor het remmen van RNase-activiteit is breed (actief bij pH 5-9) en vertoont maximale activiteit bij pH 7-8.
