Multiplex qPCR-sondevoormengsel
Katnummer: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) is een pre-oplossing voor 2x realtime kwantitatieve PCR-amplificatie, gekenmerkt door hoge gevoeligheid en specificiteit, die blauw van kleur is, en het effect heeft van monstertoevoeging.Dit product is een 2× Mix voorgemengd reagens dat maximaal vier fluorescente kwantitatieve PCR-reacties in één reactieputje mogelijk maakt.Dit product bevat de genetisch gemodificeerde antilichaammethode tegen het hot-start Taq-enzym, waardoor de amplificatiegevoeligheid en specificiteit aanzienlijk wordt verbeterd.Tegelijkertijd heeft dit product de multi-reactiebuffer diepgaand geoptimaliseerd, wat de amplificatie-efficiëntie van de reactie kan verbeteren en de effectieve amplificatie van sjablonen met lage concentratie kan bevorderen.Dit product kan worden gebruikt voor genotypering en multiplex kwantitatieve analyse.
Specificatie
| Goede start | Ingebouwde hotstart |
| Detectiemethode | Primer-sonde-detectie |
| PCR-methode | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA-polymerase |
| Soort monster | DNA |
Opslag condities
Het product wordt verzonden met droogijs en kan 2 jaar bij -25~-15℃ worden bewaard.
Instructies
1. ReactieSysteem
| Componenten | Volume (μl) | Laatste concentratie |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Mastermix | 12.5 | 1× |
| Primermengsel (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Sondemix (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referentiekleurstof | 0,5 | 1× |
| Sjabloon-DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | tot 25 | - |
Opmerkingen:Meng vóór gebruik grondig om overmatige belletjes door krachtig schudden te voorkomen.
A.Primerconcentratie: Primer Mix bevat meerdere primerparen, meestal heeft elke primer een eindconcentratie van 0,2 μmol/L en kan indien nodig ook worden aangepast tussen 0,1 en 0,5 μmol/L.
B.Probeconcentratie: Probe Mix bevat meerdere probes met verschillende fluorescentiesignalen, en de concentratie van elke probe kan worden aangepast tussen 50 en 250 nmol/L, afhankelijk van de specifieke situatie.
1.Rox-kleurstofreferentie: het wordt gebruikt op Real Time PCR-amplificatie-instrumenten zoals Applied Biosystems om de fout te corrigeren van het fluorescentiesignaal dat tussen putjes wordt gegenereerd;dit product bevat geen Rox-kleurstofreferentie.Indien nodig wordt Cas#10200 aanbevolen.
2.Sjabloonverdunning: qPCR is zeer gevoelig en het wordt aanbevolen om de sjabloon te verdunnen voor gebruik.Als de template een cDNA-voorraadoplossing is, mag het templatevolume niet groter zijn dan 1/10 van het totale volume.
3.Reactiesysteem: 25 μl, 30 μl of 50 μl wordt aanbevolen om de effectiviteit en herhaalbaarheid van de doelgenamplificatie te garanderen.
4.Systeemvoorbereiding: bereid u voor op de superschone werkbank en gebruik de tips en reactiebuizen zonder nucleaseresidu;het wordt aanbevolen om de tips met filterpatronen te gebruiken.Vermijd kruisbesmetting en aërosolbesmetting.
2.Reactie programma
| Cyclus stap | Temp. | Tijd | Cycli |
| Initiële denaturatie | 95 ℃ | 5 mins | 1 |
| Denaturatie | 95 ℃ | 15sec | 45 |
| Gloeien/verlenging | 60 ℃ | 30sec |
Opmerkingen:
1.Uitgloeien/verlengen: De temperatuur en tijd kunnen op passende wijze worden aangepast volgens de ontworpen Tm-waarde van de primer.
2.Fluorescentiesignaalacquisitie: De fluorescentiesignaalacquisitietijd die nodig is voor verschillende qPCR-detectieinstrumenten is verschillend. Stel deze in op basis van de minimale tijdslimiet.De tijd van verschillende veel voorkomende instrumenten wordt als volgt ingesteld:
20 sec: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Snel
31 sec: Applied Biosystems 7300
32 sec: Applied Biosystems 7500
Opmerkingen
Draag de nodige PBM's, zoals laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen!
