DNase I
DNase I (Deoxyribonuclease I) is een endodeoxyribonuclease dat enkel- of dubbelstrengig DNA kan verteren.Het herkent en splitst fosfodiesterbindingen om monodeoxynucleotiden of enkel- of dubbelstrengige oligodeoxynucleotiden te produceren met fosfaatgroepen aan het 5'-uiteinde en hydroxyl aan het 3'-uiteinde.De activiteit van DNase I is afhankelijk van Ca2+ en kan worden geactiveerd door tweewaardige metaalionen zoals Mn2+ en Zn2+.5 mM Ca2+ beschermt het enzym tegen hydrolyse.In aanwezigheid van Mg2+ zou het enzym willekeurig elke plaats op elke DNA-streng kunnen herkennen en splitsen.In de aanwezigheid van Mn2+ kunnen de dubbele DNA-strengen gelijktijdig worden herkend en op vrijwel dezelfde plaats worden gekliefd, waardoor DNA-fragmenten met een plat uiteinde of DNA-fragmenten met een plakkerig uiteinde worden gevormd met 1-2 nucleotiden die uitsteken.
Producteigenschap
Runderpancreas-DNase I werd tot expressie gebracht in een gistexpressiesysteem en gezuiverd.
Ctegenstanders
| Onderdeel | Volume | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNase I, RNase-vrij | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffer | 1 ml | 1 ml | 5× 1 ml | 5× 10 ml |
Transport en opslag
1. Opslagstabiliteit: – 15℃~-25℃ voor opslag;
2. Transportstabiliteit: transport onder ijspakketten;
3. Geleverd in: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glycerol, pH 7,6 bij 25℃.
Eenheidsdefinitie
Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 1 µg pBR322-DNA in 10 minuten bij 37°C volledig zal afbreken.
Kwaliteitscontrole
RNase:5 U DNase I met 1,6 μg MS2 RNA gedurende 4 uur bij 37 ℃ levert geen afbraak op, zoals bepaald door agarosegelelektroforese.
Bacterieel Endotoxine:LAL-test, volgens Chinese Farmacopee IV editie 2020, gellimiettestmethode, algemene regel (1143).Het bacteriële endotoxinegehalte moet ≤10 EU/mg zijn.
Gebruiksaanwijzing
1. Bereid de reactieoplossing in de RNase-vrije buis volgens de onderstaande verhoudingen:
| Onderdeel | Volume |
| RNA | X μg |
| 10 × DNase I-buffer | 1 μl |
| DNase I, RNase-vrij (5U/μL) | 1 U per μg RNA |
| ddH2O | Tot 10 μl |
2,37 ℃ gedurende 15 minuten;
3. Voeg de terminatiebuffer toe om de reactie te stoppen en verwarm gedurende 10 minuten op 65 ℃ om DNase I te inactiveren. Het monster kan direct worden gebruikt voor het volgende transcriptie-experiment.
Opmerkingen
1. Gebruik 1U DNase I per μg RNA, of 1U DNase I voor minder dan 1 μg RNA.
2. EDTA moet worden toegevoegd tot een eindconcentratie van 5 mM om te voorkomen dat RNA wordt afgebroken tijdens de inactivatie van het enzym.
