CHO HCP ELISA-kit
Bij deze test wordt gebruik gemaakt van een éénstaps immunosorbent-ELISA-methode.Monsters die CHOK1 HCP bevatten, reageren gelijktijdig met HRP-gelabeld geit-anti-CHOK1-antilichaam en anti-CHOK1-antilichaam gecoat op de ELISA-plaat, en vormen uiteindelijk een sandwichcomplex van vaste-fase antilichaam-HCP-gelabeld antilichaam.Ongebonden antigeen-antilichaam kan worden verwijderd door de ELISA-plaat te wassen.Het TMB-substraat wordt aan het putje toegevoegd voor voldoende reactie.De kleurontwikkeling wordt gestopt na het toevoegen van de stopoplossing, en de OD of absorptiewaarde van de reactieoplossing bij 450/650 nm wordt afgelezen met een microplaatlezer.De OD-waarde of absorptiewaarde is evenredig met het HCP-gehalte in de oplossing.Hieruit kan de HCP-concentratie in de oplossing worden berekend volgens de standaardcurve.
Sollicitatie
Deze kit wordt gebruikt om het gehalte aan CHOK1-gastheerceleiwitresiduen in monsters kwantitatief te detecteren.
Ctegenstanders
| S/N | Onderdeel | Concentratie | Opslag condities |
| 1 | CHOK1 HCP-standaard | 0,5 mg/ml | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/ml | ≤–20℃, beschermen tegen licht |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, beschermen tegen licht |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8℃ |
| 5 | Oplossing stoppen | NA | RT |
| 6 | Afdichters voor microplaten | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8℃ |
| 8 | Voorcoatingsplaten met hoge adsorptie | NA | 2-8℃ |
Vereiste apparatuur
| Verbruiksartikelen/apparatuur | Vervaardiging | Catalogus |
| Microplaatlezer | Moleculaire apparaten | Spectra Max M5, M5e of gelijkwaardig |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, of gelijkwaardig |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digitaal, of gelijkwaardig |
Opslag en stabiliteit
1.Transport bij -25~-15°C.
2.De opslagomstandigheden zijn zoals weergegeven in Tabel 1;componenten 1-2 worden opgeslagen ≤–20°C,5-6 worden opgeslagen RT,3、4,7,8 worden opgeslagen bij 2-8℃;de geldigheidsduur bedraagt 12 maanden.
Productparameters
1.Gevoeligheid: 1ng/ml
2.Detectiebereik: 3 - 100 ng/ml
3.Precisie: CV binnen de test ≤ 10%, CV tussen de tests ≤ 15%
4.HCP-dekking: >80%
5.Specificiteit: Deze kit is universeel omdat deze specifiek reageert met CHOK1 HCP, onafhankelijk van het zuiveringsproces.
Voorbereiding van reagentia
1.PBST 0,05%
Neem 15 ml 20×PBST 0,05%, verdund in ddH2O, en aangevuld tot 300 ml.
2.1,0% BSA
Neem 1 g BSA uit de fles en verdun in 100 ml PBST 0,05%, meng goed tot het volledig is opgelost en bewaar bij 2-8°C.De bereide verdunningsbuffer is 7 dagen geldig.Het wordt aanbevolen om indien nodig voorbereidingen te treffen.
3.Detectieoplossing 2μg/ml
Neem 48 μl 0,5 mg/ml Anti-CHO HCP-HRP en verdun in 11.952 μl 1% BSA om een eindconcentratie van 2 μg/ml detectieoplossing te verkrijgen.
4.Kwaliteitscontrole en voorbereiding van CHOK1 HCP-standaarden
| Buis Nee. | Origineel | Concentratie | Volume | 1% BSA | totale volume | Laatste |
| A | Standaard | 0,5 mg/ml | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1.000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tabel: Voorbereiding van kwaliteitscontrole en normen
Testprocedure
1.Bereid de reagentia zoals aangegeven in “Reagensbereiding” hierboven.
2.Neem 50 μl standaarden, monsters en QC's (zie tabel 3) in elk putje en voeg vervolgens 100 μl detectieoplossing (2 μg/ml) toe;Dek de plaat af met sealer en plaats de ELISA-plaat op de thermomixer.Incubeer bij 500 tpm, 25 ± 3 ℃ gedurende 2 uur.
3.Keer de microplaat om in de gootsteen en gooi de coatingoplossing weg.Pipetteer 300 μl PBST 0,05% in elk putje om de ELISA-plaat te wassen en de oplossing weg te gooien, en herhaal het wassen 3 keer.Keer het bord om op een schone papieren handdoek en dep het droog.
4.Voeg 100 μl TMB-substraat (zie tabel 1) toe aan elk putje, sluit de ELISA-plaat af en incubeer in het donker bij 25 ± 3 ℃ gedurende 15 minuten.
5.Pipetteer 100 μl stopoplossing in elk putje.
6.Meet de absorptie bij een golflengte van 450/650 nm met een microplaatlezer.
7.Analyseer gegevens met SoftMax of gelijkwaardige software.Teken de standaardcurve met behulp van een logistisch regressiemodel met vier parameters.
Standaardcurvevoorbeeld
OPMERKING: Als de concentratie HCP in het monster de bovengrens van de standaardcurve overschrijdt, moet deze vóór het testen op de juiste manier worden verdund met verdunningsbuffer.
OPMERKINGEN
De stopoplossing is 2M zwavelzuur. Wees voorzichtig om spatten te voorkomen!
