2×HiF Taq plus Mastermix
Katnummer: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (met kleurstof) is een gebruiksklare 2x voorgemengde oplossing die Plus HIF DNA-polymerase, dNTP's en geoptimaliseerde buffer bevat.Twee monoklonale antilichamen bij kamertemperatuur die de polymerase-activiteit en 3′ → 5′-exonuclease-activiteit remmen, worden aan de mastermix toegevoegd voor eenvoudige en zeer specifieke Hot Start PCR.De verlengingsfactor wordt aan het mastermengsel toegevoegd om het enzym een lange fragmentamplificatiecapaciteit te geven, de lengte van de amplificatie kan maximaal 13 kb zijn, het enzym heeft een 5′ → 3′ DNA-polymerase-activiteit en een 3′ → 5′-DNA-polymerase-activiteit. exonuclease-activiteit, de betrouwbaarheid ervan is 83 maal die van Taq DNA-polymerase, wat 9 maal die van gewone DNA-polymerase is.Het is geschikt voor de amplificatie van complexe templates, het amplificatieproduct heeft een stomp uiteinde.
2×HIF Taq plus Master Mix (met kleurstof) heeft de voordelen van snel en gemakkelijk, hoge gevoeligheid, sterke specificiteit, goede stabiliteit, enz., Het reactiesysteem hoeft alleen primers en sjablonen toe te voegen en kan worden versterkt door een twee- stapprotocol, waardoor de experimentele stappen worden vereenvoudigd en tijd wordt bespaard.Dit product bevat elektroforese-indicatorkleurstoffen en PCR-producten kunnen rechtstreeks voor elektroforese worden gebruikt.Daarnaast bevat het product ook een specifiek beschermingsmiddel, zodat de mastermix na herhaaldelijk invriezen en ontdooien een stabiele activiteit kan behouden.
Opslag condities
Producten moeten gedurende 1 jaar bij -25 ~ -15 ℃ worden bewaard.
Specificaties
Productspecificatie | Mastermix |
Concentratie | 2× |
Goede start | Ingebouwde hotstart |
Overhang | Bot |
Reactiesnelheid | Snel |
Grootte (eindproduct) | Tot 13 kb |
Voorwaarden voor transport | Droog ijs |
Product type | High-fidelity PCR-voormengsels |
Instructies
1.PCR-reactiesysteem
Componenten | Volume (μl) |
DNA-sjabloon | Geschikt |
Voorwaartse primer (10 μmol/L) | 2.5 |
Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
2×HIF Taq plus Mastermix | 25 |
ddH2O | tot 50 |
2.Aanbevolen gebruik van verschillende sjablonen
Type sjabloon | Versterk fragmenten van 1 kb tot 10 kb |
Genomisch DNA | 50ng-200ng |
Plasmide of viraal DNA | 10pg-20ng |
cDNA | 1-2,5 µl (niet meer dan 10% van het uiteindelijke PCR-reactievolume) |
3.Versterkingsprotocol
1) Tweestapsprotocol (complexiteitssjabloon)
Cyclus stap | Temp. | Tijd | Cycli |
Initiële denaturatie | 98℃ | 3 minuten | 1 |
Denaturatie | 98℃ | 10sec | 30-35 |
Verlenging | 68℃ | 30 sec/kb | |
Laatste verlenging | 72℃ | 5 minuten | 1 |
2) Driestapsprotocol (regulier protocol)
Cyclus stap | Temp. | Tijd | Cycli |
Initiële denaturatie | 98℃ | 3 minuten | 1 |
Denaturatie | 98℃ | 10sec | 30-35 |
Gloeien | 60℃ | 20 sec | |
Verlenging | 72℃ | 30 sec/kb | |
Laatste verlenging | 72℃ | 5 minuten | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (complexiteitssjabloon)
Cyclus stap | Temperatuur | Tijd | Cycli |
Initiële denaturatie | 98℃ | 3 minuten | 1 |
Denaturatie | 98℃ | 10 sec | 15 (1℃ reductie per cyclus) |
Gradiëntgloeien | 70-55℃ | 20 sec | |
Verlenging | 72℃ | 30 sec/kb | |
Denaturatie | 98℃ | 10 sec |
20 |
Gloeien | 55℃ | 20 sec | |
Verlenging | 72℃ | 30 sec/kb | |
Laatste verlenging | 72℃ | 5 minuten | 1 |
Functies onder verschillende versterkingsprotocollen
Protocoll | Twee stappen | Drie stappen | Gradiëntgloeien |
Spec. | snel | medium | langzaam |
Specificiteit | hoog | medium | hoog |
PCR-opbrengst | medium | hoog | medium |
Detectiesnelheid | hoog | medium | hoog |
Opmerkingen
Draag de nodige PBM's, zoals laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen!