UDG/UNG-enzymen
UDG (uracil DNA-glycosylase) kan de hydrolyse van de N-glycosidische link tussen de uracilbase en de suiker-fosfaat-skelet in ssDNA en dsDNA katalyseren.Het kan gemakkelijk aërosolvervuiling onder controle houden en is geschikt voor gangbare moleculair-biologische systemen zoals PCR, qPCR, RT-qPCR en LAMP.
Specificaties
| Expressie gastheer | Recombinant E. coli met uracil-DNA-glycosylasegen |
| Moleculair gewicht | 24. 8kDa |
| Puurheid | ≥95% (SDS-PAGINA) |
| Warmte-inactivatie | 95℃, 5~10 minuten |
| Eenheidsdefinitie | Eén eenheid (U) wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om de hydrolyse van 1 μg dU-bevattend dsDNA in 30 minuten bij 25℃ te katalyseren. |
Opslag
Het product moet twee jaar bij -25℃~-15°C worden bewaard.
Instructies
1.Bereiding van het PCR-reactiemengsel volgens het volgende systeem
| Componenten | Volume (μl) | Eindconcentratie |
| 10×PCR-buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP(10 mmol/l) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/uitloog) | 1 | 0,2 mmol/uitloog |
| Sjabloon-DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA-polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNA-glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μl |
| ddH₂O | Tot 50 | - |
Opmerking: Volgens de experimentele vereisten kan de eindconcentratie van dUTP worden aangepast tussen 0,2-0,6 mmol/l, en kan 0,2 mmol/l dTTP selectief worden toegevoegd.
2.Versterkingsprocedure
| Cyclus stap | Temperatuur | Tijd | Cycli |
| dU-bevattende sjabloondegradatie | 25℃ | 10 minuten | 1 |
| UDG-activering, initiële denaturatie van het sjabloon | 95℃ | 5~10 minuten | 1 |
| Denaturatie | 95℃ | 10 sec |
30-35 |
| Gloeien | 60℃ | 20 sec | |
| Verlenging | 72℃ | 30sec/kb | |
| Laatste verlenging | 72℃ | 5 minuten | 1 |
Opmerking: De reactietijd bij 25°C kan binnen 5-10 minuten worden aangepast, afhankelijk van de experimentele vereisten.
Opmerkingen
1.UDG is actief in de meeste PCR-reactiebuffers.
2.Enzymen moeten bij gebruik in een koelbox of op een ijsbad worden bewaard en onmiddellijk na gebruik bij -20°C worden bewaard.
3.Draag de nodige PBM's, zoals laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen!
