RT-LAMP Colormetrische mastermix HCB5204A
Dit product bevat reactiebuffer, RT-Enzymes Mix (Bst DNA-polymerase en hittebestendige reverse transcriptase), gevriesdroogde beschermingsmiddelen en chromogene kleurstofcomponenten.Gebruik gewoon Buffer, het reactie-enzym en de primer worden gemengd en aan de sjabloon toegevoegd;het toevoegen van gevriesdroogde beschermer kan puur zijn.Het werd aangesloten op een lyofilisator en gelyofiliseerd, en alleen de primers en sjablonen werden toegevoegd wanneer ze werden gebruikt.Deze kit zorgt voor een snelle, duidelijke visuele detectie van amplificatie, waarbij de negatieve reactie in rood wordt aangegeven en de positieve reactie wordt aangegeven door een verandering in geel.
Onderdeel
| Onderdeel | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop-gemedieerde amplificatiebuffer (met kleurstof) | 0,96 ml | 4,80 ml×2 | 9,60 ml×10 |
| RT-Enzymenmix | 270 μl | 2,70 ml | 2,70 ml×10 |
| Gevriesdroogde beschermer | 0,96 ml×2 | 9,60 ml×2 | 9,60 ml×20 |
Toepassingen
Voor isotherme amplificatie van DNA of RNA.
Opslag condities
Vervoerd met droogijs, opgeslagen bij -25 ~ -15 ℃.Vermijd veelvuldig invriezen en ontdooien, het product is 12 maanden geldig.
Protocol
1.Ontdooi de te gebruiken reactiebuffer bij kamertemperatuur.Vortex de buizen kort of keer ze meerdere keren om om ze grondig te mengen. Centrifugeer vervolgens om de vloeistof naar de bodem van de buis te verzamelen.
2.Bereiding van reactiesysteem.Dit reagens kan worden bereid in twee reactiesystemen: een vloeibaar reactiemengsel en een gelyofiliseerd systeemmengsel.
1) Bereid het vloeibare reactiemengsel voor
| Onderdeel | Volume |
| Loop-gemedieerde amplificatiebuffer (met kleurstof) | 10 μl |
| RT-Enzymenmix | 2,8 μl |
| 10 × Primermixa | 5 μl |
| Sjablonen DNA/RNA b | × μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
2) Lyofilisatiesysteemmix
① Bereid het gelyofiliseerde mengsel voor
| Onderdeel | Volume |
| Loop-gemedieerde amplificatiebuffer (met kleurstof) | 10 μl |
| Gevriesdroogde beschermer | 20 μl |
| RT-Enzymenmix | 2,8 μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
② Lyofilisatie: het bereide mengsel werd gevriesdroogd in een systeem van 50 μl
③ Bereid het reactiemengsel voor
| Onderdeel | Volume |
| Gevriesdroogde mix | 1 stuk |
| 10 × Primermixa | 5 μl |
| Sjablonen DNA/RNA b | × μl |
| Nucleasevrij water | Tot 50 μl |
Opmerkingen:
1) een.10×Primermix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Lus F/B;
2) b.DEPC (wateroplosbaar) wordt aanbevolen voor nucleïnezuurtempl.
1.Incubeer bij 65°C gedurende 30-45 minuten, wat op passende wijze kan worden verlengd afhankelijk van de kleurverandering. Reactietijd.
2.Met het blote oog was geel positief en rood negatief.
Opmerkingen
1.Zout kan op de bodem van de bufferbuis verschijnen, kort vortexen of de buizen meerdere keren omkeren om grondig te mengen bij kamertemperatuur.
2.De reactietemperatuur kan worden geoptimaliseerd tussen 62 ℃ en 68 ℃, afhankelijk van de staat van de primers.
3.De verpakte reagentia mogen niet langdurig aan lucht worden blootgesteld.
4.De rode en gele verkleuringsreactie is afhankelijk van de pH-verandering van het reactiesysteem. Gebruik de daarin aanwezige Tris-nucleïnezuuropslagoplossing niet, aanbevolen om ddH te gebruiken2O opgeslagen nucleïnezuur;
5.Het experiment moet worden gestandaardiseerd, inclusief de voorbereiding van het reactiesysteem, lyofilisatie, monsterverwerking en monstertoevoegingsproces;
6.Om contaminatie te voorkomen, wordt aanbevolen om het reactiesysteem op een ultraschone werkbank voor te bereiden, in andere gevallen. Voeg sjablonen toe aan de zuurkast van de kamer om vals-positieve interferentie te voorkomen.
