Rnase A
Ribonuclease A (RNaseA) is een enkelstrengs polypeptide dat 4 disulfidebindingen bevat met een molecuulgewicht van ongeveer 13,7 kDa.RNase A is een endoribonuclease dat specifiek enkelstrengs RNA op C- en U-residuen afbreekt.Specifiek herkent de splitsing de fosfodiësterbinding gevormd door de 5'-ribose van een nucleotide en de fosfaatgroep op de 3'-ribose van het aangrenzende pyrimidine-nucleotide, zodat de 2,3'-cyclische fosfaten worden gehydrolyseerd tot de overeenkomstige 3'-ribose. 'nucleosidefosfaten (pG-pG-pC-pA-pG wordt bijvoorbeeld gesplitst door RNase A om pG-pG-pCp en A-PG te genereren).RNase A is het meest actief bij het splitsen van enkelstrengs RNA.De aanbevolen werkconcentratie is 1-100 μG/ml, compatibel met verschillende reactiesystemen.Een lage zoutconcentratie (0-100 mM NaCl) kan worden gebruikt voor het knippen van enkelstrengs RNA, dubbelstrengs RNA en RNA-ketens gevormd door RNA-DNA-hybridisatie.
Bij hoge zoutconcentraties (≥0,3 M) splitst RNase A echter alleen specifiek enkelstrengs RNA.
RNase A wordt meestal gebruikt om RNA te verwijderen tijdens de bereiding van plasmide-DNA of genomisch DNA.Of DNase al dan niet actief is tijdens het bereidingsproces, kan de reactie gemakkelijk beïnvloeden.De traditionele methode van koken in een waterbad kan worden gebruikt om de DNase-activiteit te inactiveren.Dit product bevat geen DNase en protease en vereist geen warmtebehandeling vóór gebruik.Bovendien kan dit product ook worden gebruikt in experimenten in de moleculaire biologie, zoals RNase-beschermingsanalyse en RNA-sequentieanalyse.
Opslag condities
Het product moet gedurende 2 jaar bij -25℃~-15℃ worden bewaard.
Specificaties
| Verschijning | Poeder |
| Hoeveelheid | 100mg / 1g |
| Product type | RNase A |
Instructies
Dit is een van de gebruikelijke methoden voor het bereiden van RNase A-opslagoplossing.Het kan ook worden bereidmet andere methoden volgens de traditionele methoden in het laboratorium of in de referentieliteratuur (zoalsdirect oplossend in 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 of Tris-NaCl-oplossing)
1. Gebruik 10 mM natriumacetaat (pH 5,2) om 10 mg/ml RNase A-bewaaroplossing te bereiden.
2. Verwarmen op 100 ℃ gedurende 15 minuten.
3. Koel af tot kamertemperatuur, voeg 1/10 volume 1 M Tris-HCl (pH 7,4) toe en stel de pH in op 7,4 (voorVoeg bijvoorbeeld 500 ml 10 mg/ml RNase-bewaaroplossing 1 M Tris-HCl, pH 7,4 toe.
4. Subverpakt bij -20 ℃ voor bevroren opslag, die tot 2 jaar stabiel kan zijn.
[Opmerkingen]:
Bij het koken van een RNaseA-oplossing onder neutrale omstandigheden zal er RNase-precipitatie ontstaan;Kook het bij een lagere pH en als er neerslag optreedt, kan dit worden waargenomen, wat kan worden veroorzaakt door de aanwezigheid van eiwitonzuiverheden.Als er na het koken sediment wordt aangetroffen, kunnen de onzuiverheden worden verwijderd door middel van centrifugatie op hoge snelheid (13.000 tpm) en vervolgens worden verpakt voor opslag in de vriezer.
Opmerkingen
Draag de nodige PBM's, zoals laboratoriumjas en handschoenen, om uw gezondheid en veiligheid te garanderen.
