Fosfatase alkalisch (ALP)
Beschrijving
Alkalische fosfatase is afgeleid van een recombinante E. coli-stam die het TAB5-gen draagt.Het enzym katalyseert de defosforylering van de 5'- en 3'-uiteinden van DNA- en RNA-fosfomono-esters.Ook hydrolyseert het ribose, evenals deoxyribonucleosidetrifosfaten (NTP's en dNTP's).TAB5 alkalische fosfatase werkt op 5' uitstekende, 5' verzonken en stompe uiteinden.De fosfatase kan in veel toepassingen in de moleculaire biologie worden gebruikt, zoals klonen of labelen van probe-uiteinden om de gefosforyleerde uiteinden van DNA of RNA te verwijderen.Bij kloneringsexperimenten verhindert defosforylering dat het gelineariseerde plasmide-DNA zelfligeert.Het kan ook niet-geïncorporeerde dNTP's afbreken in PCR-reacties om een sjabloon voor DNA-sequencing te bereiden.Het enzym wordt volledig en onomkeerbaar geïnactiveerd door gedurende 5 minuten te verwarmen op 70°C, waardoor verwijdering van de fosfatase voorafgaand aan ligatie of eindlabeling overbodig wordt.
Gebruik
1. Alkalische fosfatase gekoppeld aan eiwitten (antilichamen, streptavidine enz.) kan specifiek doelmoleculen identificeren en kan worden gebruikt bij ELISA-, WB- en histochemische detectie;
2. Alkalische fosfatase kan worden gebruikt om het 5'-uiteinde van DNA of RNA te defosforiseren om zelfkoppeling te voorkomen;
3. Het bovenstaande gedefosforyleerde DNA of RNA kan worden gelabeld door radioactief gemerkte fosfaten (via T4-polynucleotidekinase)
Chemische structuur
Specificatie
| Testobjecten | Specificaties |
| Enzym activiteit | 5U/μl |
| Endonuclease-activiteit | Niet gedetecteerd |
| Exonuclease-activiteit | Niet gedetecteerd |
| Nicking-activiteit | Niet gedetecteerd |
| RNase-activiteit | Niet gedetecteerd |
| E.coli-DNA | ≤1kopie/5U |
| Endotoxine | LAL-test, ≤10EU/mg |
| Puurheid | ≥95% |
Transport en opslag
Vervoer:Omgeving
Opslag :Bewaren bij 2-8°C
Aanbevolen hertestLeven:2 jaar
