Eénstaps RT-qPCR SYBR groene premix
Katnummer: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix is voor fluorescentiekwantificering op basis van SYBR Green I-kleurstof.Met behulp van genspecifieke primers worden reverse transcriptie- en qPCR-reacties in één buis voltooid, waardoor de noodzaak voor het herhaaldelijk openen van de dop en pipetteren overbodig wordt, waardoor de assay-efficiëntie aanzienlijk wordt verbeterd en het risico op contaminatie wordt verminderd.Voor RNA-monsters maakt de kit gebruik van hittebestendige reverse transcriptase voor efficiënte cDNA-synthese en HotStart Taq DNA-polymerase voor kwantitatieve amplificatie.Onder het geoptimaliseerde buffersysteem kan de gevoeligheid van de kit oplopen tot 0,1 pg voor sterk tot expressie gebrachte doelen en tot 1 pg voor matig tot expressie gebrachte doelen.De kit is geschikt voor de amplificatie en kwantificering van DNA-monsters.Het maakt de gevoelige detectie en kwantificering van nucleïnezuren uit verschillende planten- en dierenmonsters, cellen en micro-organismen mogelijk.
Componenten
| No | Naam | Volume | Volume |
| 1 | Geavanceerde buffer | 250 μl | 2×1,25 ml |
| 2 | Geavanceerde enzymenmix | 20 μl | 200 μl |
| 3 | RNase-vrij H2O | 250 μl | 2×1,25 ml |
Opslag condities
Dit product moet gedurende 1 jaar worden bewaard bij -25 ~ -15 ℃, weg van licht.
Instructies
1. Configuratie van het reactiesysteemd
| Componenten | Volume (μl) | Volume (μl) | Eindconcentratie |
| Geavanceerde buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Geavanceerde enzymenmix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase-vrij H2Oc | tot 25 | tot 50 | - |
Opmerkingen:
1) een.TDe uiteindelijke primerconcentratie was 0,2 μmol/l, die indien nodig ook tussen 0,1 en 1 μmol/l kon worden aangepast.
2) b.Het reagens is uiterst gevoelig, met totaal RNA in het bereik van 1 pg-1 μg, en testen van menselijke monsters toonden een optimale input van 1 pg-100 ng aan, waarbij werd gecontroleerd voor een algehele Ct-waarde in het bereik van 15-30, indien van toepassing.
3) c.Het wordt aanbevolen om 20 μl of 50 μl te gebruiken om de validiteit en reproduceerbaarheid van de doelgenamplificatie te garanderen.
4) d.Bereid u voor in de ultraschone werkbank en gebruik tips en reageerbuisjes die vrij zijn van nucleaseresiduen;tips met filterpatronen worden aanbevolen.Vermijd kruisbesmetting en aërosolbesmetting.
2.Reactie programma
| Cyclus stap | Temp. | Tijd | Cycli |
| Omgekeerde transcriptie | 50℃a | 6 minuten | 1 |
| Initiële denaturatie | 95℃ | 5 mins | 1 |
| Amplificatie reactie | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 60℃b | 30 sec | ||
| Smeltcurvefase | Instrumentstandaarden | 1 | |
Opmerkingen:
1) een.De omgekeerde transcriptietemperatuur kan worden gekozen tussen 50-55°C, afhankelijk van de experimentele behoeften.Voor DNA-monsters kan het omgekeerde transcriptieproces worden weggelaten.
2) b.In speciale gevallen kan de gloei-/verlengingstemperatuur worden aangepast aan de hand van de Tm-waarde van de primer; 60°C wordt aanbevolen.
Opmerkingen
1. Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden.
2. Voor uw veiligheid dient u laboratoriumjassen en wegwerphandschoenen te dragen.
