DNase I (Rnase-vrij) (5u/ul)
Katnummer: HC4007A
DNase I (Deoxyribonuclease I) is een endodeoxyribonuclease dat enkel- of dubbelstrengig DNA kan verteren.Het herkent en splitst fosfodiesterbindingen om monodeoxynucleotiden of enkel- of dubbelstrengige oligodeoxynucleotiden te produceren met fosfaatgroepen aan het 5'-uiteinde en hydroxyl aan het 3'-uiteinde.De activiteit van DNase I hangt af van Ca2+en kan worden geactiveerd door tweewaardige metaalionen zoals Mn2+en Zn2+.5 mM Ca2+beschermt het enzym tegen hydrolyse.In aanwezigheid van mgr2+kon het enzym willekeurig elke plaats op elke DNA-streng herkennen en splitsen.In aanwezigheid van Mn2+kunnen de dubbele DNA-strengen tegelijkertijd op vrijwel dezelfde plaats worden herkend en gesplitst om DNA-fragmenten met een plat uiteinde of DNA-fragmenten met een plakkerig uiteinde te vormen met 1-2 nucleotiden die uitsteken.
Componenten
| Naam | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-vrij | 20 μl | 200 μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNase I-buffer | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Opslag condities
-25℃~-15℃ voor opslag;Transport onder ijspakketten.
Instructies
1. Bereid de reactieoplossing in de RNase-vrije buis volgens de onderstaande verhoudingen:
| Onderdeel | Volume |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I-buffer | 1μl |
| DNase I, RNase-vrij (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Tot 10 μl |
Opmerking: ①Bereken het volume DNase I dat moet worden toegevoegd op basis van de hoeveelheid RNA.
2. 37 ℃ gedurende 15 minuten;
3. Voeg 0,5 M EDTA toe tot de eindconcentratie van 2,5 mM ~ 5 mM en verwarm gedurende 10 minuten bij 65 ℃ om de reactie te stoppen.Het monster kan direct worden gebruikt voor de volgende reactie, zoals omgekeerde transcriptieexperiment.
Eenheidsdefinitie
Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die 1 µg pBR322 volledig zal afbrekenDNA in 10 minuten bij 37℃.
Kwaliteitscontrole
RNase:5U DNase I met 1,6 µg MS2 RNA gedurende 4 uur bij 37℃ levert geen afbraak op, aangezienbepaald door agarosegelelektroforese.
Opmerkingen
1. Bereid 0,5MEDTA zelf voor.
2. Gebruik 1U DNase I per µg RNA.Als het RNA echter minder dan 1 µg bedraagt, gebruik dan 1U DNase I.
3. Plaats het enzym tijdens gebruik op ijs.
