Virale DNA/RNA-extractiekit
Deze kit is geschikt voor de snelle extractie van zeer zuiver viraal DNA/RNA uit monsters zoals nasofaryngeale uitstrijkjes, milieu-uitstrijkjes, supernatanten van celculturen en supernatanten van weefselhomogenaten.De kit is gebaseerd op silicamembraanzuiveringstechnologie, waardoor het gebruik van organische oplosmiddelen met fenol/chloroform of tijdrovende alcoholprecipitatie voor het extraheren van viraal DNA/RNA van hoge kwaliteit overbodig wordt.De verkregen nucleïnezuren zijn vrij van onzuiverheden en klaar voor gebruik in vervolgexperimenten zoals reverse transcriptie, PCR, RT-PCR, real-time PCR, next-generation sequencing (NGS) en Northern blot.
Opslag condities
Bewaren bij 15 ~ 25℃ en transporteren bij kamertemperatuur
Componenten
| Componenten | 100RXNS |
| Buffer VL | 50 ml |
| Buffer RW | 120 ml |
| RNase-vrij ddH2 O | 6 ml |
| FastPure RNA-kolommen | 100 |
| Verzamelbuisjes (2 ml) | 100 |
| RNase-vrije verzamelbuisjes (1,5 ml) | 100 |
Buffer VL:Zorg voor een omgeving voor lysis en binding.
Buffer RW:Verwijder resterende eiwitten en andere onzuiverheden.
RNase-vrij ddH2O:Elueer DNA/RNA uit het membraan in de spinkolom.
FastPure RNA-kolommen:Adsorbeert specifiek DNA/RNA.
Verzamelbuisjes 2 ml:Verzamel filtraat.
RNase-vrije verzamelbuisjes 1,5 ml:Verzamel DNA/RNA.
Toepassingen
Nasofaryngeale uitstrijkjes, omgevingsswabs, supernatanten van celkweken en supernatanten van weefselhomogenaten.
Zelfbereide Materials
RNase-vrije pipettips, RNase-vrije centrifugebuisjes van 1,5 ml, centrifuge, vortexmixer en pipetten.
Experimenteer proces
Voer alle volgende stappen uit in een bioveiligheidskast.
1. Voeg 200 μl van het monster toe aan een RNase-vrije centrifugebuis (aanvullen met PBS of 0,9% NaCl als er onvoldoende monster is), voeg 500 μl Buffer VL toe, meng goed door 15 – 30 seconden te vortexen en centrifugeer kort om het mengsel op de bodem van de buis te verzamelen.
2. Plaats FastPure RNA-kolommen in verzamelbuisjes van 2 ml.Breng het mengsel van stap 1 over naar FastPure RNA-kolommen, centrifugeer gedurende 1 minuut bij 12.000 rpm (13.400 x g) en gooi het filtraat weg.
3. Voeg 600 μl Buffer RW toe aan FastPure RNA-kolommen, centrifugeer gedurende 30 seconden bij 12.000 rpm (13.400 x g) en gooi het filtraat weg.
4. Herhaal stap 3.
5. Centrifugeer de lege kolom gedurende 2 minuten bij 12.000 rpm (13.400 x g).
6. Breng FastPure RNA-kolommen voorzichtig over in nieuwe RNase-vrije verzamelbuisjes van 1,5 ml (meegeleverd in de kit) en voeg 30 – 50 μl RNase-vrije ddH2O toe aan het midden van het membraan zonder de kolom aan te raken.Laat 1 minuut bij kamertemperatuur staan en centrifugeer gedurende 1 minuut bij 12.000 rpm (13.400 x g).
7. Gooi FastPure RNA-kolommen weg.Het DNA/RNA kan direct worden gebruikt voor daaropvolgende tests, of voor een korte periode bij -30~-15°C of voor een langere periode bij -85 ~-65°C worden bewaard.
Opmerkingen
Alleen voor onderzoeksgebruik.Niet voor gebruik bij diagnostische procedures.
1. Breng de monsters vooraf op kamertemperatuur.
2. Virussen zijn zeer besmettelijk.Zorg ervoor dat vóór het experiment alle noodzakelijke veiligheidsmaatregelen zijn genomen.
3. Vermijd herhaaldelijk invriezen en ontdooien van het monster, aangezien dit kan leiden tot afbraak of verminderde opbrengst van het geëxtraheerde virale DNA/RNA.
4. Zelfbereide apparatuur omvat RNase-vrije pipetpunten, RNase-vrije centrifugebuizen van 1,5 ml, centrifuge, vortexmixer en pipetten.
5. Draag bij gebruik van de kit een laboratoriumjas, latex wegwerphandschoenen en een wegwerpmasker en gebruik RNase-vrije verbruiksartikelen om het risico op RNase-besmetting te minimaliseren.
6. Voer alle stappen uit bij kamertemperatuur, tenzij anders aangegeven.
Mechanisme en workflow
