Alkalische fosfatase (ALP)

Alkalische fosfatase is afgeleid van een recombinante E. coli-stam die het TAB5-gen draagt.Het enzym katalyseert de defosforylering van 5'- en 3'-uiteinden van DNA- en RNA-fosfomonesters.Het hydrolyseert ook ribose, evenals deoxyribonucleosidetrifosfaten (NTP's en dNTP's).TAB5 alkalische fosfatase werkt op 5' uitstekende, 5' verzonken en stompe uiteinden.De fosfatase kan in veel toepassingen in de moleculaire biologie worden gebruikt, zoals klonen of het labelen van probe-uiteinden om de gefosforyleerde uiteinden van DNA of RNA te verwijderen.Bij kloneringsexperimenten voorkomt defosforylering dat het gelineariseerde plasmide-DNA zelfligeert.Het kan ook niet-geïntegreerde dNTP's in PCR-reacties afbreken om een ​​sjabloon voor DNA-sequencing te bereiden.Het enzym wordt volledig en onomkeerbaar geïnactiveerd door gedurende 5 minuten te verwarmen op 70°C, waardoor verwijdering van de fosfatase voorafgaand aan ligatie of eindlabeling overbodig wordt.