5×Neoscript Snelle RT-qPCR Premix plus-UNG

Katnummer: HCB5142A

Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) is een zeer stabiele op probe gebaseerde mix uit één buis, geschikt voor reverse transcriptie in één stap en kwantitatieve PCR (qRT-PCR).Het ondersteunt het voormengen van primers en probes en blijft stabiel na langdurige opslag bij lage temperaturen.Het te testen monster kan bij gebruik direct worden toegevoegd, zonder extra buisopening/pipetteren.Dit product bevat componenten, bijvoorbeeld hot-start DNA-polymerase, M-MLV, hitte-labiel uracil DNA-glycosylase (TS-UNG), RNase-remmer, MgCl₂, dNTP's (met dUTP in plaats van dTTP) en stabilisatoren.Met de genetisch gemodificeerde snelle amplificatie reverse transcriptase en DNA-polymerase is het mogelijk om de PCR-amplificatie binnen 20-40 minuten te voltooien.Dit reagens maakt gebruik van een speciale buffer voor qPCR met gemengde enzymen van anti-remmend amplificatie-enzym en UNG-enzym.Daarom kan het een goede amplificatie van doelgenen verkrijgen en valse amplificatie voorkomen die wordt veroorzaakt door PCR-resten en aerosolvervuiling.Dit reagens is compatibel met de meeste fluorescentie-kwantitatieve PCR-instrumenten van fabrikanten zoals Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad en Roche.

Onderdeel

1.25×Neoscript Snelle RTase/UNG-mix

2.5×Neoscript Fast RT-premixbuffer (dUTP)

Opslag condities

Alle componenten moeten bij -20℃ worden bewaard voor langdurige opslag en bij 4℃ voor maximaal 3 maanden.Na het ontdooien grondig mengen en voor gebruik centrifugeren.Vermijd veelvuldig invriezen en ontdooien.

Voorbereiding van het qRT-PCR-reactiesysteem

1) a. De eindconcentratie van de primer is gewoonlijk 0,2 μM.Voor betere resultaten kan de primerconcentratie worden geoptimaliseerd binnen het bereik van 0,2-1 μM.Over het algemeen kan de sondeconcentratie worden geoptimaliseerd binnen het bereik van 0,1-0,3 μM.

2) b. Bij gebruik van een snelle PCR-procedure kan het verhogen van de concentratie van primers en probes resulteren in betere amplificatieresultaten, en hun verhouding moet dienovereenkomstig worden geoptimaliseerd.

3) Verschillende soorten monsters bevatten verschillende soorten en inhoud van de remmer en het aantal kopieën van het doelgen.Het monstervolume moet worden beoordeeld op basis van de feitelijke omstandigheden.Maak indien nodig een verdunning van het monster met nucleasevrij water of TE-buffer.

Reactie Comstandigheden

Kwaliteitscontrole

1.Functiedetectie: gevoeligheid, specificiteit en herhaalbaarheid van qPCR.

2.Geen exogene nuclease-activiteit: geen exogene endonuclease- en exonuclease-vervuiling.

Opmerkingen

1.De amplificatiesnelheid van snelle DNA-polymerase bedraagt ​​niet minder dan 1 kb/10s.Verschillende PCR-instrumenten hebben verschillende verwarmings- en koelsnelheden, temperatuurcontrolemodi en thermische geleidbaarheid, en daarom is optimalisatie van uw primer/probe-concentratie en loopmethode in combinatie met uw specifieke snelle PCR-instrument essentieel.

2.Dit product heeft een brede toepasbaarheid en is geschikt voor hooggevoelige moleculaire diagnose.De driestaps-PCR-methode wordt aanbevolen voor primers met een lage annealingstemperatuur of voor amplificatie van lange fragmenten van meer dan 200 bp.

3.Omdat verschillende amplicons een verschillende benuttingsefficiëntie van dUTP en een verschillende gevoeligheid voor UNG hebben, moeten de reagentia worden geoptimaliseerd als de detectiegevoeligheid afneemt bij gebruik van het UNG-systeem.Neem indien nodig contact met ons op voor technische ondersteuning.

4.Om amplificatie van overgedragen PCR-producten te voorkomen, zijn voor amplificatie een speciaal experimenteel gebied en een pipet vereist.Werk met handschoenen, kleed u regelmatig om en open de PCR-buis niet na amplificatie.